теория и практика лабораторных гистологических исследований
Теория и практика лабораторных гистологических исследований. Методические рекомендации для преподавателя по организации теоретических занятий
В работе представлены учебно-методические материалы по МДК 05.01 Теория и практика лабораторных гистологических исследований, включающие краткий теоретический курс на II курсе. Данные методические рекомендации разработаны в соответствии с ФГОС СПО по специальности 31.02.03 «Лабораторная диагностика» для профессионального модуля ПМ.05 «Проведение лабораторных гистологических исследований».
Оглавление
Приведённый ознакомительный фрагмент книги Теория и практика лабораторных гистологических исследований. Методические рекомендации для преподавателя по организации теоретических занятий предоставлен нашим книжным партнёром — компанией ЛитРес.
Ирина Юрьевна Карева
© Татьяна Юрьевна Белозерова, 2019
© Татьяна Петровна Зимина, 2019
© Александр Николаевич Афонин, 2019
Создано в интеллектуальной издательской системе Ridero
Задачи, которые выполняет в настоящее время патологическая анатомия, ставят ее среди медицинских дисциплин в особое положение: с одной стороны — это теория медицины, которая, раскрывая материальный субстрат болезни, служит клинической практике, с другой стороны — это клиническая морфология для установления диагноза, служащая теории медицины.
Изучение структурных основ болезни происходит на разных уровнях: организменном, системном, органном, тканевом, клеточном, субклеточном и молекулярном. Изучение на тканевом и клеточном уровне осуществляется с помощью микроскопических методов исследования.
В патологоанатомических отделениях клинической морфологией занимаются врачи-патологоанатомы, качество работы которых напрямую зависит от умения среднего звена отделения — медицинских лабораторных техников-гистологов.
Приведённый ознакомительный фрагмент книги Теория и практика лабораторных гистологических исследований. Методические рекомендации для преподавателя по организации теоретических занятий предоставлен нашим книжным партнёром — компанией ЛитРес.
Смотрите также
Теория и практика психологического консультирования в сексологии. Избранные лекции в авторской редакции
Система саморегуляции «Синхрометод Ключ» Хасая Магомедовича Алиева. Часть 1
Опасный нарцисс. Книга первая. Нарциссическое расстройство личности: теория и проявления
На приеме у психотерапевта – подросток. Учебное пособие для врачей и психологов. Издание 2-е, дополненное
Сергей Александрович Кулаков
Основы теории искусственных нейронных сетей
Александр Аполлонович Кириченко
Иск и его элементы
Автоматизированное рабочее место аналитика ИС, предназначенного для поддержки принятия решения
Творчество Д. Д. Шостаковича и русская музыкальная культура середины XX века. IV том учебного курса «Отечественная музыкальная литература XX – первой половины XXI века»
Роль городского населения в градостроительстве. Услубий қўлланма
Педагогический дизайн совместной сетевой деятельности
Как найти свою мечту и превратить ее в цель?
Александр Юрьевич Ефремов
Экспериментальная психология. Курс лекций
Общая и частная гистология
Основы бухгалтерского учета. Учебное пособие
Теория и практика лабораторных гистологических исследований. Методические рекомендации для преподавателя по организации теоретических занятий
В работе представлены учебно-методические материалы по МДК 05.01 Теория и практика лабораторных гистологических исследований, включающие краткий теоретический курс на II курсе. Данные методические рекомендации разработаны в соответствии с ФГОС СПО по специальности 31.02.03 «Лабораторная диагностика» для профессионального модуля ПМ.05 «Проведение лабораторных гистологических исследований».
Оглавление
Приведённый ознакомительный фрагмент книги Теория и практика лабораторных гистологических исследований. Методические рекомендации для преподавателя по организации теоретических занятий предоставлен нашим книжным партнёром — компанией ЛитРес.
Теоретическое занятие 10. Морфофункциональная характеристика соединительной ткани
Технологическая карта теоретического занятия по МДК (ТЗ) №10
Технологическая карта теоретического занятия по МДК (ТЗ) №10
1. Классификация соединительной ткани
В зависимости от состава и соотношения клеток, волокон, физико-химического состава аморфного вещества соединительные ткани подразделяются на следующие виды (табл.).
Классификация соединительной ткани
2. Строение и функции собственно-соединительных тканей
Группы тканей, объединенных под этим названием, развиваются из мезенхимы, и характеризуется хорошо развитым межклеточным веществом. В эту группу входит собственно соединительная ткань, хрящевая, костная и соединительная ткань со специальными свойствами, выполняет:
2. Защитную функцию;
3. Трофическую функцию.
Функциональные особенности зависят от физико-химических свойств межклеточного вещества, чем плотнее межклеточное вещество, тем более выражена опорная функция и менее трофическая. Собственно-соединительная ткань в зависимости от соотношения клеток, волокон в межклеточном веществе, делится на рыхлую и плотную.
Рыхлая волокнистая соединительная ткань.
Самая распространенная в организме, входит в состав органов, состав кожи. Сопровождает сосуды в состав слизистых и серозных оболочек в большом и меньшем количестве находятся во всех органах организма. Клетки имеют разную форму и выполняют разные функции. Основными являются фибробласты, оседлые макрофаги или гистиоциты.
Крупные отросчатые клетки, цитоплазма без резких границ переходит в межклеточное вещество, ядра крупные светлые. В цитоплазме располагаются вакуоли, РНК, полисахариды и другие вещества. Фибробласты способны к передвижению всегда устремляются в очаг раздражения или разрыва ткани, осуществляя своеобразную штопку раны. Принимает участие в образовании межклеточного вещества. Фибробласты, заканчивая цикл развития, и не способны к активным процессам называют фиброцитами.
Оседлые макрофаги или гистиоциты.
Клетки овальной формы, контуры резко очерчены, ядра не большие плотные, цитоплазма базофильна (крупная зернистость, темно-фиолетового цвета), содержит вакуоли, клетки способны к фагоцитозу и передвижению.
Являются молодыми формами, за счет которых образуются все клетки рыхлой волокнистой соединительной ткани. Клетки отросчатой формы, располагаются вокруг кровеносных сосудов.
Овальной или не правильной формы, цитоплазма заполнена гранулами гепарина (вещество, предотвращающее свертывание крови). В цитоплазме содержится ряд окислительных ферментов: липаза, фосфатаза. Располагаются клетки вокруг кровеносных сосудов группами. Их количество может увеличиваться у беременных женщин.
Располагаются в слизистой кишки, в сальнике, в лимфатических узлах, в селезенке, в костном мозге. По размеру равны эритроцитам и лимфоцитам. Ядро не большое плотное смещено к краю клетки. Цитоплазма базофильна. Принимают участие в синтезе антител. Количество плазматических клеток увеличивается при хронических воспалительных процессах.
Это молодые формы клеток, которые превращаются в другие виды клеток, т.е. за счет них идет пополнение отмирающих клеток. Кроме перечисленных встречаются: жировые, ретикулярные, лимфоциты и другие клетки.
Образовано основным бесструктурным, вязким веществом и лежащими в нем волокнами. Различают коллагеновые волокна и эластические. Коллагеновые или клей дающие не ветвятся, образует пучки, не растяжима. Состоят из белка — коллагена, фибриллярного типа, набухает в растворах кислот и щелочей, имеют поперечную исчерченность.
Эластические волокна тонкие, ветвящиеся, не образуют пучков, легко растягиваются и после устранения силы переходят в исходное состояние. Состоят из тонких волоконец, не имеет поперечной исчерченности, волоконца называют — протофибриллами, построены из белка эластина. Все клетки и волокна располагаются в основном веществе. Основное вещество — это аморфная масса в виде коллагенового раствора по консистенции — гель, содержит белки, от состояния которых зависит проницаемость соединительной ткани.
Соединительная ткань со специальными свойствами.
Состоит из жировых клеток, которые имеют форму шара, в центре капелька жира. Располагается в подкожно жировой клетчатке, образует прослойку около кровеносных сосудов в сальнике.
Из ретикулярной ткани построены кроветворные органы: спинной мозг, лимфатические узлы, селезенка, печень. Клетки округлые, могут превращаться макрофаги.
Клетки пигментной ткани содержат зерна пигмента меланина. За счет которого передается определенный цвет некоторым участкам кожи.
Пример: роговица глаза.
3. Строение и функции скелетных соединительных тканей
Плотная волокнистая соединительная ткань.
Образует сухожилия, связки, составляет основу кожи. Характеризуется хорошо развитыми волокнами особенно коллагеновыми. Между волокнами не большое количество клеток. В основном фиброцитов. В коже пучки коллагеновых волокон располагаются в различных направлениях. Такой вид ткани получил название — плотной не оформленной соединительной ткани. В сухожилиях и связках волокна располагаются по их длине такой вид ткани называется — плотной оформленной соединительной тканью.
Ткани делятся на 2 вида:
Хрящевые на 3 вида:
1. Эластический хрящ;
3. Волокнистый хрящ.
Хрящи выполняют механическую функцию.
В эмбриональном развитии почти все кости построены из гиалинового хряща. После рождения хрящ заменяется костной тканью. Остается в ребрах, трахее, бронхах. В межклеточном веществе основное вещество и коллагеновые волокна. Могут откладываться соли. На поверхности хряща клетки мелкие, вытянутые, а в центре крупные имеют по 2 ядра. Располагаются в полостях, которые называются изогенными по одиночке и группами.
Образует скелет ушной раковины и надгортанника. В межклеточном веществе большое количество эластичных волокон лежат в разных направлениях и в виде сетки. Соли в эластичном хряще не откладываются. Клетки выглядят идентично, как и в гиалиновом хряще, но изогенные области расположены столбиками.
Встречаются в соединениях костей в местах прикрепления сухожилий к костям. В межклеточном веществе большое количество параллельно расположенных коллагеновых волокон. Основное вещество выражено слабо. Откладываются соли. Клетки выглядят так же, как и в гиалиновом, но значительно крупнее.
Все хрящи покрыты надхрящницей, поверхностный слой состоит из плотной волокнистой соединительной ткани. Внутренний слой представлен клетками хондробластами. В надхрящнице располагаются кровеносные сосуды и нервные окончания, в самом хряще их нет. Питание хряща идет диффузно. Рост и регенерация хряща происходит за счет надхрящницы. Хондробласты по мере развития проникают в центр хряща, становятся крупными зрелыми клетками, которые делятся самостоятельно и называются — хондроциты.
Если нарушается питание хряща, то в нем откладываются соли. Хрящ становится мутным и ломким.
Это такая же живая ткань, в которой протекают процессы обновления и старения. Построена ткань из клеток и межклеточного вещества. В межклеточном веществе есть основное вещество, которое представлено белком — оссеином и оссеин мукоидами. Волокна костной ткани близки по строению с коллагеновой. Межклеточное вещество содержит большое количество минеральных солей: фосфорнокислый, фтористый кальций, которые придают прочность ткани. Если из кости удалить минеральные соли, т. е. декальцинировать, то кость сохраняет форму, но становится мягкой. Если удалить органическое вещество, то кость сохраняет форму, но становится хрупкой.
Существует 3 типа костных клеток:
Остеоциты: отросчатой формы, ядро округлое в центре не делится, располагаются в костных полостях, отростки в костных канальцах, при помощи которых клетки соединяются между собой.
Остеобласты: крупнее, с помощью них идет рост, и регенерация кости, т. е. способны к превращению в остеоциты.
Остеокласты: круглой формы лежат поодиночке, многоядерные имеют отростки, содержат ферменты, которые являются разрушителем костной ткани.
Костная ткань делится на: грубоволокнистую и пластинчатую.
В грубоволокнистой, коллагеновые волокна образуют мощные пучки, которые лежат в различном направлении. Такое строение костей в эмбриональном периоде. После рождения этот вид ткани встречается в местах прикрепления сухожилий к костям. При росте организма все грубоволокнистые кости преобразуются в пластинчатые.
В пластинчатой костной ткани волокна располагаются в определенных направлениях, причем направления волокон в двух соседних пластинках никогда не бывают одинаковыми. Это придает большую прочность пластинчатой кости ткани по сравнению с грубоволокнистой.
В трубчатых костях пластинки залегают двумя слоями. Основной структурной единицей трубчатой кости является остеон. Представляет собой систему концентрично расположенных вставленных друг в друга костных пластинок, которые имеют форму цилиндров. В центре остеона находится канал, в котором располагаются кровеносные сосуды. Между остеонами располагаются вставленные костные пластинки. Кость может быть построена из компактного и губчатого вещества.
Теория и практика лабораторных гистологических исследований. Методические рекомендации для преподавателя по организации теоретических занятий
В работе представлены учебно-методические материалы по МДК 05.01 Теория и практика лабораторных гистологических исследований, включающие краткий теоретический курс на II курсе. Данные методические рекомендации разработаны в соответствии с ФГОС СПО по специальности 31.02.03 «Лабораторная диагностика» для профессионального модуля ПМ.05 «Проведение лабораторных гистологических исследований».
Оглавление
Приведённый ознакомительный фрагмент книги Теория и практика лабораторных гистологических исследований. Методические рекомендации для преподавателя по организации теоретических занятий предоставлен нашим книжным партнёром — компанией ЛитРес.
Теоретическое занятие 3. Строение клетки
Технологическая карта теоретического занятия по МДК (ТЗ) №3
Технологическая карта теоретического занятия по МДК (ТЗ) №3
Клетки — это функциональные и структурные единицы живых организмов.
Организм человека насчитывает приблизительно 10 14 клеток. К клеткам живых организмов предъявляется много требований. Пример: клетки должны быть маленькими по размеру (от 6 до 100 мкм). Для того чтобы скорость проходящих импульсов не имитировалась скоростью диффузий реагирующих веществ. Для клеток ткани характерен единый: обмен веществ; особенность строения; определенные функции.
Каждая клетка многоклеточного организма связана с другими клетками. Клетка способна поглощать энергию, осуществлять синтез, воспроизводиться, сокращаться, раздражаться и т. д. Между клеткой и окружающей ее средой происходит постоянный обмен веществ.
Оболочка клетки имеет 2 слоя:
1. Внешний слой, состоящий из полисахаридов, у растений он толстый и называется клеточная стенка; у животных это слой тонкий и называется гликокаликс.
2. Это плазматическая мембрана. Имеет мозаичное строение, состоит из двух слоев фосфолипидов, между которыми, мозаично располагаются белки. Белки часто подвижны, а фосфолипиды имеют 2 части: внешняя часть — гидрофобная, а внутренняя — гидрофильная.
Обеспечивают специфичность функций клетки. В мышечных клетках это миофибриллы (от лат. mio — мышца, fibrila — спец. органелла), за счет которой мышечная клетка сокращается. В нервных клетках нейрофибрилла, которая обеспечивает чувствительность цитоплазмы. В эпителиальных клетках — тонофибриллы, обеспечивает прочность клетки.
2. Клеточная теория
Ядро растительной клетки наблюдал также английский ботаник Роберт Броун (1773—1858) в 1831 г. Он же открыл «броуновское движение». Ядро — nucleus (лат.), karyon (греч. — ядро ореха). Эти работы послужили основой для создания клеточной теории. Ее сформулировали в 1838—1839 гг. немецкие ученые ботаник Матиас Шлейден (1804—1881) и физиолог, гистолог Теодор Шванн (1810—1882).
Основные положения ее:
1. Все организмы — и растительные, и животные — состоят из клеток; клетка — главная структурная единица живых организмов.
2. В основе роста живых организмов лежат размножение и рост клеток.
3. Шлейден и Шванн считали, что клетки возникают из первичного неструктурированного внеклеточного вещества. Это положение опроверг в 1859 г. немецкий врач Рудольф Вирхов (1821—1902). Он существенно дополнил клеточную теорию положением о том, что клетка происходит только из предсуществующей клетки путем деления («cellulaex cellula»). Клеточная теория обеспечила прорыв в познании структуры и функции живого. Основные ее положения сохраняют свое значение и сегодня.
Основные положения клеточной теории (в современной трактовке).
1. Клетка — элементарная живая система, единица строения, жизнедеятельности, размножения и развития. Вне клетки жизни нет.
2. Новые клетки возникают только путем деления ранее существовавших клеток.
3. Клетки всех организмов сходны по строению; в их состав входят мембраны, цитоплазма и ядро или нуклеоид.
4. Рост и развитие многоклеточного организма — следствие роста и размножения одной или нескольких исходных клеток.
5. Клеточное строение организмов — свидетельство того, что все живое имеет единое происхождение.
Теория и практика лабораторных гистологических исследований. Методические рекомендации для преподавателя по организации теоретических занятий
В работе представлены учебно-методические материалы по МДК 05.01 Теория и практика лабораторных гистологических исследований, включающие краткий теоретический курс на II курсе. Данные методические рекомендации разработаны в соответствии с ФГОС СПО по специальности 31.02.03 «Лабораторная диагностика» для профессионального модуля ПМ.05 «Проведение лабораторных гистологических исследований».
Оглавление
Приведённый ознакомительный фрагмент книги Теория и практика лабораторных гистологических исследований. Методические рекомендации для преподавателя по организации теоретических занятий предоставлен нашим книжным партнёром — компанией ЛитРес.
Теоретическое занятие 7. Морфофункциональная характеристика тканей
Технологическая карта теоретического занятия по МДК (ТЗ) №7
Технологическая карта теоретического занятия по МДК (ТЗ) №7
1. Учение о тканях: определение понятия «ткань», классификация и особенности развития тканей
Ткань — это возникшая в развитии система клеток и их производных, характеризующихся общими морфофизиологическими свойствами. Ткань состоит из клеток и межклеточного вещества.
С позиции филогенеза предполагается, что в процессе эволюции организмов образуются 4 тканевых системы, обеспечивающие основные функции организма:
1. Эпителии (покровные, отграничивающие от внешней среды).
2. Соединительные (опорно-трофические).
3. Мышечные (отвечающие за движение).
Эту классификацию 1857 г. Лейдига, подтвердили исследования Мечникова И. И. и позднейших авторов. А. А. Заварзин и Н. Г. Хлопин, которые заложили основы учения об эволюционной и онтогенетической детерминации тканей, также выдвигали положение о том, что ткани образуются в связи с основными функциями, обеспечивающими существование организма во внешней среде. Поэтому изменения тканей в эволюции идут параллельными путями (теория параллелизмов А. А. Заварзина). Однако дивергентный путь эволюции организмов (в каждой из четырех тканевых систем в конечном итоге привела к большому разнообразию видов тканей, которые гистологи в последующем стали объединять в системы или группы тканей) ведет к возникновению все большего разнообразия тканей (теория дивергентной эволюции тканей Н. Г. Хлопина). Из этого следует, что ткани в филогенезе развиваются и параллельными рядами, и дивергентно.
Развитие тканей в эмбриогенезе происходит в результате дифференцировки клеток. Под дифференцировкой понимают изменения в структуре клеток в результате их функциональной специализации, обусловленные активностью их генетического аппарата. Различают четыре основных периода дифференцировки клеток зародыша — оотипическую, бластомерную, зачатковую и тканевую дифференцировку. Проходя через эти периоды клетки зародыша образуют ткани (гистогенез).
В результате эмбрионального развития возникает зародыш, в котором различают несколько зародышевых листков.
Поверхностный наружный листок называется — эктодерма, внутренний — эндодерма, образует кишечную трубку зародыша. На спинной стороне зародыша располагается нервная трубка, а под ней плотный тяж называемый хорда. По сторонам располагается средний зародышевый листок — мезодерма. Все пространство между листками заполнено отросчатыми клетками, которые в результате развития, образуются из мезодермы и получили название мезенхима. В процессе развития зародышевых листков образуются различные ткани, из которых построены органы человека и животного.
Каждая ткань образуется из определенного зародышевого листка. При изменении условий существования организма меняется функция и строение ткани. При заболеваниях происходят различные изменения в тканях. Все ткани организма классифицируются в 4 группы:
К тканям внутренней среды относятся соединительные ткани, кровь и лимфа.
При повреждении ткани они могут восстанавливаться. Процесс восстановления ткани называется репаративная регенерация. Хорошо регенерируется эпителиальная ткань, кровь и лимфа, соединительная ткань. В мышечной, нервной тканях процесс регенерации идет медленно и не полностью.
ПМ.05 «Проведение лабораторных гистологических исследований» МДК 05.01 «Теория и практика лабораторных гистологических исследований» Лекция 1. Введение.
1. Организация лаборатории и методы гистологического исследования.
2. Общие принципы организации тканей.
Организация и оснащение патогистологической лаборатории
Гистологическая (патоморфологическая) лаборатория размещается в типовом или специально приспособленном помещении. Она должна быть оснащена необходимыми оборудованием, инструментами, лабораторной посудой и химическими реактивами.
Рабочие помещения лаборатории — комната, в которой производят вырезку секционного, биопсийного или экспериментального материала; рабочая комната лаборантов; комната для размещения аппаратуры и моечная.
Рабочие помещения должны быть оснащены приточно-вытяжной вентиляцией.
В лаборатории необходимо строго соблюдать правила противопожарной безопасности и работы с летучими и токсичными веществами.
В рабочей комнате лаборанта должны быть вытяжной шкаф, химический и физический столы, шкаф и сейф для хранения химических реактивов. Лабораторная мебель, выполненная из древесины, малопригодна для работы со многими токсичными веществами, используемыми в патоморфологии, поскольку затруднена ее последующая санитарная обработка, поэтому предпочтение следует отдавать специальной лабораторной мебели из металла и пластика, которая снабжена выдвижными частями, подводкой воды, вакуума, воздуха и газа. Рабочий стул должен иметь регулируемую высоту сиденья и спинки и легко перемещаться по полу.
Перечень необходимого оборудования лаборатории включает технические и аналитические весы, рН-метр, микротомы (санные, ротационные, замораживающие), криостат или криокит, водяную баню, столик для расплавления парафиновых срезов, комплекты автоматических пипеток, термостаты, холодильники, микроскопы, автоматы для проводки материала и др.
Лабораторное стекло, посуда, инструменты
Бесперебойная работа любой гистологической лаборатории возможна лишь при наличии достаточного набора лабораторного стекла и посуды. Наиболее часто используют чашки Петри, банки с притертыми пробками, бюксы, кюветы, химические стаканчики, предметные и покровные стекла.
Чашки Петри — плоские, широкие стеклянные чашки с крышками — используют для вырезки биопсийного материала, в них можно окрашивать «свободно плавающие» срезы, ставить гистоэнзиматические реакции в термостате и т.д.
Банки с притертыми пробками вместимостью 1-3 л чаще используют для приготовления музейных макропрепаратов, хранения и фиксации кусочков тканей, обезжиривания предметных стекол в смеси Никифорова или кислотах. Большие банки можно применять для хранения летучих веществ. Банки вместимостью 50-200 мл чаще используют для хранения летучих химических реактивов, а также для подготовки кусочков тканей к заливке (в такой посуде проводят материал, полученный при гастро- и бронхобиопсии, а также пункционных биопсиях).
Бюксы стаканчики различной вместимости (чаще 10-100 мл) с притертой пробкой, которые используют для проведения гистологических окрасок и гистохимических реакций. Для постановки реакции на целлоидиновых и замороженных срезах применяют плоские бюксы диаметром около 50 мм.
Кюветы — прямоугольные стаканчики различной высоты с крышками — используют при проведении гистологических, гистохимических, ферментохимических реакций, для одновременной окраски нескольких срезов, наклеенных на предметные стекла.
Химические стаканчики вместимостью 50-100 мл используют для проведения гистохимических и ферментохимических реакций.
Предметные стекла размером 76 х 26 мм и толщиной 2 мм служат для приготовления гистологических препаратов. Для проведения гистохимических, в том числе гистоэнзиматических, реакций желательно использовать стекла толщиной 1 мм.
Покровные стекла — тонкие и хрупкие стеклянные пластинки толщиной 0,15-0,2 мм. Чаще используют покровные стекла размером 18 х 18 и 24 х 24 мм.
В лаборатории должны быть также воронки разных размеров, фарфоровые стаканчики, ступки и мерная посуда (колбы, стаканы, цилиндры и мензурки).
Колбы из термостойкого стекла позволяют готовить реактивы, требующие нагревания. Большие колбы, как правило, служат для проточной и дистиллированной воды, а маленькие с притертыми пробками пригодны для хранения химических реактивов.
В патогистологических лабораториях применяют простые и градуированные пипетки. Вместимость последних составляет обычно от 0,1 до 100 мл; их используют при постановке гистохимических реакций и приготовлении реактивов.
Вся используемая лабораторная посуда должна быть снабжена этикетками и рационально размещена, что позволяет избежать ошибок при ее применении.
В набор используемых в гистологической лаборатории инструментов входят пинцеты (хирургические, анатомические и глазные), ножницы (анатомические, хирургические и глазные), скальпели, препаровальные иглы, шпатели — прямые и изогнутые металлические лопатки (чаще применяют при приготовлении срезов на замораживающем микротоме и целлоидиновых срезов), хирургические ножи для вырезки материала и ножи с двойным лезвием для получения тонких срезов ткани мозга. Для вырезки мелких объектов используют лезвия безопасной бритвы.
Учетная документация и ее ведение
Правильное ведение учетной документации позволяет сотрудникам патогистологической лаборатории эффективно использовать рабочее время и облегчает работу с архивным материалом.
К документации, ведение которой является обязательным, относятся: алфавитный журнал для регистрации биопсийного и операционного материала; журнал регистрации выдачи биопсийного и журнал регистрации секционного материала; направления на патогистологическое исследование.
Кроме того, у старшей сестры (старшего лаборанта) должны быть книги учета спирта, ядовитых химических реактивов, драгоценных металлов, медикаментов и каталог учета химических реактивов, по которому легко находят нужный для работы реактив.
Методы гистологического исследования
Современные методы гистологических исследований весьма многочисленны и разнообразны. Они позволяют производить структурный и гистохимический анализ гистологических объектов на микроскопическом и субмикроскопическом уровнях. Основным этапом микроскопического изучения животных тканей является исследование объекта средствами классического микроскопического метода, сущность которого определяется фиксацией материала исследования с последующим приготовлением окрашенных срезов. Фиксация сводится к закреплению прижизненного строения исследуемого объекта. К фиксирующим средствам относят формалин (5 – 20%), этиловый спирт, осмиевую кислоту и различные по составу смеси. После фиксации материала можно готовить тонкие срезы (1-10 мкм), предварительно заключив его в парафин или целлоидин. Для приготовления более толстых срезов (20 – 50 мкм) материал замораживают. Объектом исследования служат также мазки, отпечатки или тонкие пленки тканей.
Для лучшего выявления отдельных структур срезы окрашивают. Гистологические красители подразделяют на три группы: кислые, основные и специальные. Кислые красители – красящие кислоты или их соли (например, пикриновая кислота, эозин, флоксин, азокармин и др.). Кислые свойства им придают нитро-группы (NO2), хиноидные группы (0 = N = O), гидроксильные группы (ОН), карбоксильные группы (COOH). Структуры, окрашенные кислыми красителями, называют оксифильными или ацидофильными. У основных красителей (сафронин, пиронин, тионин и др.) окрашивающая способность определяется щелочной группой. Элементы ткани, окрашивающиеся основными красителями, определяют как базофильные. В качестве щелочных групп в основных красителях могут быть аминогруппы (NР2), монометиламиногрулпы (NH – CH3), имидогруппы (NH) и др.
Специальные красители специфически взаимодействуют лишь с определенными веществами. Например, судан III и осмиевая кислота выявляют жиры и жироподобные вещества.
Окрашенные срезы обезвоживают, заключают в канадский бальзам, покрывают покровным тонким стеклом и исследуют под микроскопом.
Световая микроскопия – основной метод анализа строения животных и растительных клеток и тканей. Современные микроскопы обеспечивают разрешение (возможность наблюдать две точки раздельно) порядка 0,2 мкм и дают максимальное увеличение в 2000 – 2500 раз (рис. 1). К световой микроскопии относят также фазово-контрастную микроскопию, флуоресцентную и ультрафиолетовую.
Фазово-контрастная микроскопия используется для исследования прозрачных бесцветных объектов, в частности живых клеток и тканей. При прохождении через такую среду фаза световых волн смещается на величину, определяемую толщиной материала и скоростью проходящего через него света. Фазово-контрастный микроскоп преобразует эти невидимые глазом фазовые сдвиги в изменении амплитуды световых волн. При этом получается черно-белое изображение, плотность отдельных участков которого зависит от величины произведения толщины объекта на разность в показателях преломления света в нем и в окружающей среде.
Флуоресцентная микроскопия. Флуоресценция – свечение объекта, возбуждаемое лучистой энергией. При данном исследовании препарат просматривают в ультрафиолетовых или фиолетовых и синих лучах. Различают собственную и наведенную флуоресценцию, вызванную особыми красителями – флуорохромами. Последние, взаимодействуя с различными компонентами клетки, дают специфическое свечение соответствующих структур. Например, флуорохром акридиновой оранжевой с ДНК дает зеленое свечение, а с РНК – красное. Основное преимущество этого метода – возможность прижизненных наблюдений и его высокая чувствительность.
Ультрафиолетовая микроскопия основана на использовании коротких ультрафиолетовых лучей с длиной волны 0,2 мкм. Наименьшее разрешаемое расстояние ультрафиолетового микроскопа 0,1 мкм. Изображение регистрируется на фотопластинке или на люминесцентном экране.
Электронная микроскопия – метод субмикроскопического исследования, осуществляемый с помощью трансмиссионного (просвечивающего) электронного микроскопа. В таком микроскопе длина электромагнитных волн в 100 000 раз короче волны видимого света. Теоретически разрешающая способность у него составляет 5 – 10 А (0,0005 – 0,0010 мкм) при напряжении 50000 В. В современных трансмиссионных электронных микроскопах разрешающая способность составляет 0,1 – 0,7 нм. Метод сканирующей электронной микроскопии обеспечивает объемное изучение поверхностей объектов исследования.
Авторадиография. Метод цитологического исследования, позволяющий анализировать локализацию в клетках и тканях веществ, меченных радиоактивными изотопами. Включенные в клетки изотопы восстанавливают бромистое серебро фотоэмульсии, покрывающей срез. После проявления фотоэмульсии видны зерна серебра (треки), свидетельствующие о локализации в клетке меченых веществ. Методом авторадиографии выявляют место синтеза определенных веществ, пути их внутриклеточного транспорта, состав белков и др.
Гистохимические методы исследования позволяют определить химическую природу составных элементов клеток и межклеточного вещества тканей животных организмов. В основе этих методов лежит использование специфических химических реакций с образованием нерастворимых продуктов, локализованных в области изучаемых структур. Гистохимическими методами определяют в структурах тканей аминокислоты, белки, нуклеиновые кислоты (ДНК и РНК), различные виды углеводов, липидов, активность ферментов. Продукты реакции анализируют количественно.
Методы исследования в гистологии включают приготовление гистологических препаратов с последующим их изучением с помощью светового или электронного микроскопа. Гистологические препараты представляют собой мазки, отпечатки органов, тонкие срезы кусочков органов, возможно, окрашенные специальным красителем, помещенные на предметное стекло микроскопа, заключенные в консервирующую среду и покрытые покровным стеклом.
Основные методы гистологического исследования
· Люминесцентная (флуоресцентная) микроскопия
Общие принципы организации тканей
· волокон – коллагеновых, ретикулярных, эластических.
Межклеточное вещество неодинаково выражено в разных тканях. Детальное строение и развитие структурных компонентов межклеточного вещества будет рассматриваться в лекции «Соединительные ткани».
Общепринятой является морфофункциональная классификация тканей, в соответствии с которой выделяют четыре тканевых группы:
Некоторые авторы из группы соединительных тканей выделяют кровь и лимфу как самостоятельный тканевой тип. В каждой тканевой группе (за исключением нервной ткани) выделяют несколько разновидностей или подтипов ткани.
Состояние структурных компонентов тканей и их функциональная активность постоянно изменяются под воздействием внешних факторов. Прежде всего, отмечаются ритмические колебания структурно-функционального состояния тканей – биологические ритмы:
Внешние факторы могут вызывать адаптивные (приспособительные) изменения и дезадаптивные, приводящие к распаду тканевых компонентов. Имеются регуляторные механизмы (внутритканевые, межтканевые, организменные), обеспечивающие поддержание структурного гомеостаза.
Внутритканевые регуляторные механизмы обеспечиваются, в частности, способностью зрелых клеток выделять биологически активные вещества – кейлоны, угнетающие размножение молодых (стволовых и бластных) клеток этой же популяции. При гибели значительной части зрелых клеток выделение кейлонов уменьшается, что стимулирует пролиферативные процессы и приводит к восстановлению численности клеток данной популяции. Межтканевые регуляторные механизмы обеспечиваются индуктивным взаимодействием, прежде всего с участием лимфоидной ткани (иммунной системы), в поддержании структурного гомеостаза. Организменные регуляторные факторы обеспечиваются влиянием эндокринной и нервной систем.
При некоторых внешних воздействиях может нарушиться естественная детерминация молодых клеток, что может привести к превращению одного тканевого типа в другой. Такое явление носит название метаплазии, и осуществляется только в пределах данной тканевой группы. Например, замена однослойного призматического эпителия желудка однослойным плоским.
3. Регенерация тканей. Регенерация – восстановление клеток, направленное на поддержание функциональной активности данной системы. В регенерации различают такие понятия, как форма регенерации, уровень регенерации, способ регенерации.
Формы регенерации:
· физиологическая регенерация – восстановление клеток ткани после их естественной гибели (например, кроветворение);
· репаративная регенерация – восстановление тканей и органов после их повреждения (травмы, воспаления, хирургического воздействия и так далее).
Уровни регенерации соответствуют уровням организации живой материи):
· клеточный способ (размножением (пролиферацией) клеток);
· внутриклеточный способ (внутриклеточное восстановление органелл, гипертрофия, полиплоидия);
· заместительный способ (замещение дефекта ткани или органа соединительной тканью, обычно с образованием рубца, например: образование рубцов в миокарде после инфаркта миокарда).
Факторы, регулирующие регенерацию:
· гормоны – биологически активные вещества;
· медиаторы – индикаторы метаболических процессов;
· кейлоны – это вещества гликопротеидной природы, которые синтезируются соматическими клетками, основная функция – торможение клеточного созревания;
· антагонисты кейлонов – факторы роста;
· микроокружение любой клетки.
4. Интеграция тканей. Ткани, являясь одним из уровней организации живой материи, входят в состав структур более высокого уровня организации живой материи – структурно-функциональных единиц органов и в состав органов, в которых происходит интеграция (объединение) нескольких тканей.
Механизмы интеграции:
· межтканевые (обычно индуктивные) взаимодействия;
Например, в состав сердца входят сердечная мышечная ткань, соединительная ткань, эпителиальная ткань. При заболеваниях органов вначале обычно поражается одна ткань, что затем может сказаться и на состоянии других тканей, благодаря индуктивным межтканевым взаимодействиям. 