на что заменен гост 54904
Национальный стандарт РФ ГОСТ Р 54904-2012 «Продукты пищевые, продовольственное сырье. Метод определения остаточного содержания сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором» (утв. приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 17 мая 2012 г. N 71-ст) (отменен)
Национальный стандарт РФ ГОСТ Р 54904-2012
«Продукты пищевые, продовольственное сырье. Метод определения остаточного содержания сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором»
(утв. приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 17 мая 2012 г. N 71-ст)
1 Разработан Федеральным государственным бюджетным учреждением «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ «ВГНКИ»)
2 Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность»
3 Утвержден и введен в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 17 мая 2012 г. N 71-ст
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты в части молока, молочных продуктов, яиц, яичного порошка, мяса и мясных продуктов, мяса и продуктов из мяса птицы, меда, рыбы, морепродуктов, а также продовольственное сырье и устанавливает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием для определения остаточного содержания сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике
ГОСТ Р 12.1.019-2009 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
ГОСТ Р 51447-99 (ИСО 3100-1-91) Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб
ГОСТ Р 52121-2003 Яйца куриные пищевые. Технические условия
ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания
ГОСТ Р 53597-2009 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы отбора проб и подготовка их к испытаниям
ГОСТ Р 53669-2009 Пищевые продукты переработки яиц сельскохозяйственной птицы. Методы отбора проб и органолептического анализа
ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны
ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требований безопасности
ГОСТ 12.2.085-2002 Сосуды, работающие под давлением. Клапаны предохранительные. Требования безопасности
ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 5848-73 Реактивы. Кислота муравьиная. Технические условия
ГОСТ 13867-68 Продукты химические. Обозначения чистоты
ГОСТ 19792-2001 Мед натуральный. Технические условия
ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу
ГОСТ 31339-2006 Рыба, нерыбные объекты и продукция из них. Правила приемки и методы отбора проб
3.1 Определение остаточного содержания сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов проводят методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (ВЭЖХ-МС/МС).
3.2 Количественное определение остаточного содержания сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов проводят методом внутреннего стандарта по площади пика идентифицированных соединений при помощи градуировочной кривой.
3.3 Детектирование анализируемых проб проводят в режиме регистрации выбранных реакций.
4 Условия выполнения измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
Хроматографические измерения проводят в условиях, указанных инструкцией по эксплуатации соответствующего прибора.
5 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, материалы и реактивы
5.1 Для определения остаточного содержания сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов применяют следующие средства измерений, вспомогательное оборудование и материалы:
— масс-спектрометр, диапазон измерений от 50 до 500 атомных единиц массы (а.е.м.), массовым разрешением не менее 500, точностью измерения массы не ниже 0,1 а.е.м., режимом получения и анализа фрагментных ионов (режим МС/МС);
— систему высокоэффективную жидкостную хроматографическую, состоящую из бинарного насоса со смесителем, термостата хроматографической колонки, обеспечивающего нагрев температуры до 50°С;
— компьютер с установленным программным обеспечением для управления масс-спектрометром и обработки результатов измерений;
— весы по ГОСТ Р 53228, обеспечивающие точность взвешивания с пределами абсолютной допускаемой погрешности однократного взвешивания 0,01 мг и 1,00 мг;
— модуль термостатируемый нагревательный с системой отдувки растворителей инертным газом и максимальной температурой термостатирования 50°С;
— встряхиватель вибрационный для пробирок орбитального типа движения с амплитудой встряхивания 3 мм и диапазоном скоростей от 150 до 2500 об/мин;
— центрифугу лабораторную рефрижераторную со скоростью вращения ротора не менее 5000 об/с и диапазоном температур охлаждения от 4°С до 20°С, с адаптерами для пробирок вместимостью 15 и микроцентрифужных пробирок вместимостью 1,5 ;
— баню ультразвуковую с рабочей частотой не менее 20 кГц и объемом не менее 1 ;
— колонку хроматографическую обращенно-фазную длиной не менее 150 мм с размером диаметра частиц сорбента не более 3,5 мкм;
— устройство вакуумное для твердофазной экстракции;
— пробирки полипропиленовые вместимостью 15 с герметично закрывающимися пластмассовыми крышками;
— фильтры мембранные с размером диаметра пор не более 0,2 мкм;
— виалы (флаконы) стеклянные вместимостью 2 с завинчивающимися крышками и тефлоновыми прокладками диаметром 9 мм;
— пробирки мерные стеклянные П-2-10-14/23 по ГОСТ 1770;
— колбы мерные стеклянные 2-100-2, 2-1000-2 по ГОСТ 1770.
5.2 При определении остаточного содержания сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов применяют следующие реактивы:
— кислоту муравьиную по ГОСТ 5848, ч.д.а.;
Все реактивы должны относиться к подгруппе чистоты 2 (х.ч.) или 3 (ч.д.а.) по ГОСТ 13867.
5.3 При определении остаточного содержания сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов применяют:
5.3.1 Стандартные образцы сульфаниламидов:
— сульфахлорпиридазин с содержанием основного вещества не менее 99,0% (HPLC, Sigma)**;
— сульфатиазол с содержанием основного вещества не менее 99,0% (HPLC, Sigma)**;
— сульфадиметоксин с содержанием основного вещества не менее 99,0% (HPLC, Sigma)**;
— сульфахиноксалина натриевая соль с содержанием основного вещества не менее 95,0% (HPLC, Sigma)**;
— сульфапиридин с содержанием основного вещества 99% (HPLC, Sigma)**;
— сульфаметазин с содержанием основного вещества не менее 99,5% (HPLC, Sigma)**;
— сульфамеразин с содержанием основного вещества не менее 99,9% (HPLC, Sigma)**;
— сульфадиазина натриевая соль с содержанием основного вещества не менее 99,0% (HPLC, Sigma)**;
— триметоприм с содержанием основного вещества не менее 99,1%(HPLC, Fluka)**;
— сульфамоксол с содержанием основного вещества не менее 99,1% (HPLC, Sigma)**;
— сульфаэтоксипиридазин с содержанием основного вещества не менее 99,5%, (Fluka)**;
— сульфаметоксазол с содержанием основного вещества не менее 99,9% (HPLC, Sigma)**;
— сульфагуанидин моногидрат с содержанием основного вещества не менее 99,8% (HPLC, Sigma)**;
— сульфаметоксипиридазин с содержанием основного вещества не менее 99,2% (HPLC, Sigma)**;
— сульфаниламид с содержанием основного вещества не менее 99,9% (HPLC, Sigma)**.
5.3.2 Стандартные образцы нитроимидазолов:
— ронидазол с содержанием основного вещества не менее 99,9% (HPLC, Witega)**;
— диметридазол с содержанием основного вещества не менее 99,9% (HPLC, Witega)**;
— метронидазол с содержанием основного вещества не менее 99,5% (HPLC, Witega)**;
— гидроксиметронидазол с содержанием основного вещества не менее 99,5% (HPLC, Witega)**;
— ипронидазол с содержанием основного вещества не менее 99,0% (HPLC, Witega)**;
— гидроксиипронидазол с содержанием основного вещества не менее 99,0% (HPLC, Witega)**;
— гидроксиметилметронидазол с содержанием основного вещества не менее 99,0% (HPLC, Witega)**;
— тинидазол с содержанием основного вещества не менее 99,0% (HPLC, Sigma)**;
— тернидазол с содержанием основного вещества не менее 99,0% (HPLC, Witega)**.
5.3.3 Стандартные образцы пенициллинов:
— оксацилин с содержанием основного вещества не менее 99,3% (HPLC, Riedel-de Haen)**;
— амоксициллина тригидрат с содержанием основного вещества не менее 98,7% (HPLC, Riedel-de Haen)**;
— клоксациллина натриевая соль с содержанием основного вещества не менее 98,1% (HPLC, Riedel-de Haen)**;
— диклоксациллина натриевая соль с содержанием основного вещества не менее 98,5% (HPLC, Riedel-de Haen)**;
— ампициллина тригидрат с содержанием основного вещества не менее 99,8% (HPLC, Riedel-de Haen)**;
— бензилпенициллин с содержанием основного вещества не менее 99,7% (HPLC, Riedel-de Haen)**;
— феноксиметилпенициллин с содержанием основного вещества не менее 99,7% (HPLC, Riedel-de Haen)**.
5.3.4 Стандартные образцы амфениколов:
— хлорамфеникол с содержанием основного вещества не менее 99,1% (HPLC, Sigma)**;
— флорфеникол амин с содержанием основного вещества не менее 99,3% (KRKA)**;
— флорфеникол с содержанием основного вещества не менее 99,37% (HPLC, Laboratories HIPRA)**.
5.3.5 Внутренние стандарты сульфаниламидов:
— сульфатиазол- с содержанием основного вещества 99% (Isotopic purity, TRC)**;
— сульфадиметоксин- с содержанием основного вещества 99% (Isotopic purity, TRC)**;
— сульфаметазин- с содержанием основного вещества 99% (Isotopic purity, TRC)**;
— сульфадиазин- с содержанием основного вещества 99% (Isotopic purity, TRC)**;
— триметоприм- с содержанием основного вещества 99% (Isotopic purity, TRC)**;
— сульфаметоксазол- с содержанием основного вещества 99% (Isotopic purity, TRC)**.
5.3.6 Внутренние стандарты нитроимидазолов:
— ронидазол- с содержанием основного вещества 99,8% (HPLC, Witega)**;
— диметридазол- с содержанием основного вещества 99,5% (HPLC, Witega)**;
— метронидазол- с содержанием основного вещества 99,0% (HPLC, Witega)**;
— гидроксиметронидазол- с содержанием основного вещества 99,5% (HPLC, Witega)**;
— ипронидазол- с содержанием основного вещества 99,0% (HPLC, Witega)**;
— гидроксиипронидазол- с содержанием основного вещества 99,5% (HPLC, Witega)**.
5.3.7 Внутренний стандарт пенициллинов:
— бензилпенициллин- с содержанием основного вещества не менее 99,7% (HPLC, Witega)**.
5.3.8 Внутренний стандарт амфениколов:
— хлорамфеникол- с содержанием основного вещества 99% (Fluka)**.
5.4 Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающим необходимую точность измерения, а также реактивов и материалов по качеству не хуже вышеуказанных.
6 Подготовка к проведению измерений
6.1 Подготовка лабораторной посуды и реактивов
6.1.1 Мойку и сушку посуды проводят в отдельном помещении, оборудованном приточно-вытяжной вентиляцией. Не допускается проведение подготовки посуды в данном помещении для других анализов. Для сушки лабораторной посуды и подготовки реактивов необходимо использовать отдельные сушильные шкафы.
6.1.2 Стеклянную посуду подвергают стандартной процедуре очистки лабораторной посуды с последующей промывкой органическим растворителем ацетоном (дважды).
6.1.3 Процедуру промывки ацетоном следует проводить в вытяжном шкафу. Рекомендуется на стадиях промывки использовать ультразвуковую баню. Окончательную сушку посуды проводят в сушильном шкафу, установленном в вытяжном шкафу, при температуре от 105°С до 110°С.
6.1.4 Каждую новую партию реактивов проверяют на отсутствие контаминации анализируемыми соединениями путем проведения холостого опыта в соответствии с процедурой анализа.
6.2 Приготовление растворов
6.2.1 Приготовление растворов элюентов
6.2.1.1 Для приготовления раствора элюента мобильной фазы А в мерную колбу вместимостью 1000 вносят 1000 деионизированной воды.
6.2.1.2 Для приготовления раствора элюента мобильной фазы Б в мерную колбу вместимостью 1000 вносят 1000 метанола.
6.2.3 Приготовление раствора метанола
Для приготовления раствора метанола в мерной колбе вместимостью 1000 смешивают 500 деионизированной воды и 500 метанола. Колбу помещают на ультразвуковую баню на 5 мин.
6.2.4 Приготовление градуировочных растворов
6.2.4.1 Приготовление градуировочных растворов
6.2.4.2 Приготовление градуировочных растворов
6.2.4.3 Приготовление градуировочных растворов (внутренних стандартов анализируемых соединений)
6.2.4.4 Приготовление градуировочных растворов (внутренних стандартов анализируемых соединений)
6.2.4.5 Приготовление градуировочных растворов
Для приготовления градуировочного раствора к сухому остатку после упаривания «чистой» пробы, полученной в соответствии с условиями подготовки проб (раздел 7), переносят по 0,1 растворов и и доводят до метки 1 деионизированной водой.
6.2.4.6 Приготовление градуировочных растворов
Для приготовления градуировочного раствора к сухому остатку после упаривания «чистой» пробы, полученной в соответствии с условиями подготовки проб (раздел 7), переносят 0,01 раствора и 0,1 раствора и доводят до метки 1 деионизированной водой.
6.2.4.7 Приготовление градуировочных растворов
Для приготовления градуировочного раствора к сухому остатку после упаривания «чистой» пробы, полученной в соответствии с условиями подготовки проб (раздел 7), переносят 0,001 раствора и 0,1 раствора и доводят до метки 1 деионизированной водой.
6.3 Построение градуировочной характеристики
6.3.2 Для получения градуировочных данных используют не менее четырех уровней массовых концентраций матричных градуировочных растворов. Определяемые в анализируемой пробе массовые концентрации анализируемых соединений должны находиться в диапазоне массовых концентраций градуировочной характеристики.
При построении градуировочной характеристики используют функцию, обеспечивающую наилучшее совпадение с матричными точками (отклонение массовых концентраций, вычисленных при помощи градуировочной характеристики, от известных массовых концентраций должно быть минимальным).
Градуировочная характеристика считается приемлемой, если рассчитанное значение квадрата коэффициента корреляции для градуировочной характеристики каждого фрагментного иона составит не менее 0,98.
6.3.4 Вычисление площади пика проводят для каждого дочернего иона анализируемых соединений. Допускается проведение количественных измерений по одному наиболее интенсивному дочернему иону. Для подтверждения наличия сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов рассчитывают массовые концентрации по площадям пиков менее интенсивных дочерних ионов.
Наименование сульфаниламида, нитроимидазола, пенициллина, амфеникола
Наименование внутреннего стандарта
6.4 Условия хроматографических измерений
6.4.1 Хромато-масс-спектрометр включают и настраивают в соответствии с техническим руководством по его эксплуатации и устанавливают следующие хроматографические параметры:
Детектирование пиков проводят методом «регистрации выбранных реакций» (MRM). Для каждого соединения измеряют сигнал для двух ионов согласно таблице 2.
Наименование сульфаниламида, нитроимидазола, пенициллина, амфеникола
Ион предшественник, m/z
Время удерживания, мин
7 Отбор и подготовка проб
7.2 Подготовка проб
7.2.1 Обработка проб мяса, мясных продуктов, рыбы и морепродуктов, субпродуктов и полуфабрикатов из мяса птицы
7.2.2 Обработка проб яиц
7.2.3 Обработка проб яичного порошка
7.2.4 Обработка проб молока и молочных продуктов
Молоко, сливки, сметану, кисломолочные напитки и продукты, сухие молочные продукты перед анализом тщательно перемешивают.
10 г сыра, творога или творожных изделий взвешивают на часовом стекле или в чашке Петри, переносят в ступку и тщательно растирают.
Далее обработку проб и подготовку к хроматографированию проводят по 7.2.3.
100 г твердого сыра измельчают на гомогенизаторе и взвешивают на весах (с пределом абсолютной допускаемой погрешности однократного взвешивания 1,0 мг) в полипропиленовой пробирке вместимостью 50 по 1,0 г гомогенизированной пробы. Далее обработку проб и подготовку к хроматографированию проводят по 7.2.1.
7.2.5 Обработка проб меда
7.3 Очистка подготовленных проб методом твердофазной экстракции
Картриджи для твердофазной экстракции кондиционируют на вакуумном устройстве для твердофазной экстракции, пропуская последовательно: 2 ацетонитрила и 2 деионизированной воды. Затем через картридж пропускают анализируемую пробу, полученную в соответствии с 7.2 (на всех этапах твердофазной экстракции, кроме этапов сушки, вакуум или избыточное давление не применяют). Промывают картридж 2 деионизированной воды, затем сушат картридж 10 мин. Далее элюируют аналиты 2 ацетонитрила. Элюат упаривают на нагревательном модуле в токе воздуха до 0,1 при температуре 40°С.
7.4 Перерастворение и подготовка к хроматографированию
Для перерастворения и подготовки к хроматографированию объем полученного упаренного элюата в мерной пробирке вместимостью 10 доводят до 1 деионизованной водой и помещают на ультразвуковую баню на одну минуту. Полученный экстракт фильтруют через мембранный фильтр и используют для ВЭЖХ-МС/МС анализа.
8 Порядок выполнения измерений
8.1 ВЭЖХ/МС/МС анализ
Для определения остаточного содержания сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов проводят ВЭЖХ-МС/МС анализ в условиях, указанных в 6.4.
ВЭЖХ-МС/МС анализ выполняют в виде серии измерений, включающей:
— образец мобильной фазы А;
— образец, полученный в условиях подготовки проб, где вместо матрицы использовался 1,0 г деионизованной воды;
— образец, приготовленный ранее в соответствии с требованиями раздела 7, в зависимости от типа анализируемой матрицы;
— образцы с известным содержанием анализов для контроля стабильности градуировки.
Если остаточное содержание сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов в анализируемой пробе превышает значение максимального градуировочного уровня, то анализируемую пробу разводят в 10 или более раз мобильной фазой А и проводят повторные измерения.
8.2 Контроль качества измерений
8.2.1 Каждая серия измерений включает в себя несколько степеней подтверждения качества измерений.
8.2.2 10 градуировочного раствора (см. 6.2.4.7) вводят в инжектор хроматографа. Полученное соотношение сигнал/шум для каждого аналита должно быть не менее 10.
8.2.3 Для исключения контаминации пробы используемыми реагентами проводят обработку заведомо чистого образца в соответствии с разделом 7 в зависимости от типа анализируемой матрицы.
8.2.4 Для учета матричного эффекта при расчете остаточных содержаний нитроимидазолов, сульфаниламидов, пенициллинов и амфениколов используют матричную градуировку (см. 6.3).
8.2.5 Для исключения возможной контаминации реагентов, используемых в процессе подготовки проб, анализируемую пробу ткани заменяют 1,0 деионизованной воды.
9 Обработка результатов измерений
9.1 Расчеты остаточного содержания сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов и площади пика выполняются системой обработки данных в автоматическом режиме.
9.2 Вычисление площади пика проводят для двух дочерних ионов (таблица 2) для каждого сульфаниламида, нитроимидазола, пенициллина, амфеникола. Отклонения относительных ионных интенсивностей ионов в анализируемой пробе от относительных ионных интенсивностей ионов, полученных при анализе градуировочных растворов, не должны превышать значений, указанных в таблице 3.
Относительная ионная интенсивность
Максимально допустимые отклонения для ВЭЖХ-МС/МС детектирования,%
На что заменен гост 54904
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ, ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ
Метод определения остаточного содержания сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором
Дата введения 2013-07-01
1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ «ВГНКИ»)
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность»
ВНЕСЕНЫ: поправка, опубликованная в ИУС N 7, 2017 год; поправка, опубликованная в ИУС N 10, 2018 год; поправка, опубликованная в ИУС N 12, 2019 год
Поправки внесены изготовителем базы данных
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты в части молока, молочных продуктов, яиц, яичного порошка, мяса и мясных продуктов, мяса и продуктов из мяса птицы, меда, рыбы, морепродуктов, а также продовольственное сырье и устанавливает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием для определения остаточного содержания сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике
ГОСТ Р 12.1.019-2009 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
ГОСТ Р 51447-99 (ИСО 3100-1-91) Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб
ГОСТ Р 52121-2003 Яйца куриные пищевые. Технические условия
ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания
ГОСТ Р 53597-2009 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы отбора проб и подготовка их к испытаниям
ГОСТ Р 53669-2009 Пищевые продукты переработки яиц сельскохозяйственной птицы. Методы отбора проб и органолептического анализа
ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны
ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.2.085-2002 Сосуды, работающие под давлением. Клапаны предохранительные. Требования безопасности
ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 5848-73 Реактивы. Кислота муравьиная. Технические условия
ГОСТ 13867-68 Продукты химические. Обозначения чистоты
ГОСТ 19792-2001* Мед натуральный. Технические условия
ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу
ГОСТ 29245-91 Консервы молочные. Методы определения физических и органолептических показателей
ГОСТ 31339-2006 Рыба, нерыбные объекты и продукция из них. Правила приемки и методы отбора проб
3 Сущность метода
3.1 Определение остаточного содержания сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов проводят методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (ВЭЖХ-МС/МС).
3.2 Количественное определение остаточного содержания сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов проводят методом внутреннего стандарта по площади пика идентифицированных соединений при помощи градуировочной кривой.
3.3 Детектирование анализируемых проб проводят в режиме регистрации выбранных реакций.
4 Условия выполнения измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
ГОСТ Р 54904-2012
Продукты пищевые, продовольственное сырье. Метод определения остаточного содержания сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором
Купить ГОСТ Р 54904-2012 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее
Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО «ЦНТИ Нормоконтроль»
Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.
Способы доставки
Оглавление
1 Область применения
2 Нормативные ссылки
4 Условия выполнения измерений
5 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, материалы и реактивы
6 Подготовка к проведению измерений
6.1 Подготовка лабораторной посуды и реактивов
6.2 Приготовление растворов
6.3 Построение градуировочной характеристики
6.4 Условия хроматографических измерений
7 Отбор и подготовка проб
7.2 Подготовка проб
7.3 Очистка подготовленных проб методом твердофазной экстракции
7.4 Перерастворение и подготовка к хроматографированию
8 Порядок выполнения измерений
8.1 ВЭЖХ/МС/МС анализ
8.2 Контроль качества измерений
9 Обработка результатов измерений
10 Метрологические характеристики
11 Оформление результатов измерении
12 Контроль качества результатов измерений
12.1 Контроль полноты извлечения внутренних стандартов
12.2 Контроль правильности результатов измерений
13 Требования безопасности
Приложение А (обязательное) Контроль стабильности результатов измерений
| Дата введения | 01.07.2013 |
|---|---|
| Добавлен в базу | 01.10.2014 |
| Завершение срока действия | 01.04.2020 |
| Актуализация | 01.02.2020 |
Этот ГОСТ находится в:
Организации:
Чтобы бесплатно скачать этот документ в формате PDF, поддержите наш сайт и нажмите кнопку:
ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ
ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ, ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ
Метод определения остаточного содержания сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором
Предисловие
1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ «ВГНКИ»)
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность»
3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 17 мая 2012 г. №71-ст
Правила применения настоящего стандарта установлены в ГОСТ Р 1.0-2012 (раздел 8). Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе «Национальные стандарты», а официальный текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (gost.ru)
Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии
Таблица 1 — Соответствие между анализируемыми соединениями и внутренними стандартами
Наименование сульфаниламида, нитроимидазола, пенициллина, амфеникола
Наименование внутреннего стандарта
Г идрокси метил метронидазол-Дз
Сул ьфахи ноксал и н
6.4 Условия хроматографических измерений
6.4.1 Хромато-масс-спектрометр включают и настраивают в соответствии с техническим руководством по его эксплуатации и устанавливают следующие хроматографические параметры:
— скорость потока элюента — 200 мм 3 /мин;
Разделение проводят в режиме градиентного элюирования. При регистрации положительных ионов: в начальный момент по 0,5 мин — соотношение фазы А/Б по объему (90/10); с 0,5 по
20,0 мин — градиентное элюирование к 40 % фазы Б; с 20,0 по 23,0 мин — соотношение фазы А/Б по объему (60/40); с 23,0 по 23,2 мин — переход к 100% фазы Б; с 23,2 по25,0 мин — поддерживается 100 % фазы Б; с 25,0 по 33,0 мин — уравновешивание колонки в фазе А/Б по объему (90/10).
При регистрации отрицательных ионов: в начальный момент до 0,5 мин соотношение фаз А/Б по объему (75/25); с 0,5 по 4,0 мин — градиентное элюирование до 100 % фазы Б; с 4,0 по 6,5 мин поддерживается 100 % фазы Б; с 6,5 по 13 мин — уравновешивание колонки растворителем А/Б по объему (75/25).
Детектирование пиков проводят методом «регистрации выбранных реакций» (MRM). Для каждого соединения измеряют сигнал для двух ионов согласно таблице 2.
Таблица 2 — Параметры воздействия на ионы в режиме MRM и условиях элекгроспрея с регистрацией положительных или отрицательных ионов
Наименование сульфаниламида, нитроимидазола, пенициллина, амфеникола
Ион предшественник, m/z
Время удерживания, мин
Гидрокси метил метронидазол
Г идрокси метил метронидазол-Дз*
Окончание таблицы 2
Наименование сульфаниламида, нитроимидазола, пенициллина, амфеникола
Ион предшественник, m/z
Время удерживания, мин
Сул ьфахи ноксал и н
7 Отбор и подготовка проб
7.1.1 Отбор проб мяса и мясных продуктов — по ГОСТ Р 51447.
7.1.2 Отбор проб мяса птицы, пищевых субпродуктов и полуфабрикатов из мяса птицы — по ГОСТ Р 53597.
7.1.3 Отбор проб молока и молочных продуктов — по ГОСТ 26809.
7.1.4 Отбор проб меда — по ГОСТ 19792.
7.1.5 Отбор проб яиц и яичного порошка — по ГОСТ Р 52121 и ГОСТ Р 53669.
7.1.6 Отбор проб рыбы и морепродуктов — по ГОСТ 31339.
7.2 Подготовка проб
7.2.1 Обработка проб мяса, мясных продуктов, рыбы и морепродуктов, субпродуктов и полуфабрикатов из мяса птицы
7.2.2 Обработка проб яиц
7.2.3 Обработка проб яичного порошка
7.2.4 Обработка проб молока и молочных продуктов
Молоко, сливки, сметану, кисломолочные напитки и продукты, сухие молочные продукты перед анализом тщательно перемешивают.
10 г сыра, творога или творожных изделий взвешивают на часовом стекле или в чашке Петри, переносят в ступку и тщательно растирают.
Далее обработку проб и подготовку кхроматографированию проводят по 7.2.3.
100 г твердого сыра измельчают на гомогенизаторе и взвешивают на весах (с пределом абсолютной допускаемой погрешности однократного взвешивания ±1,0 мг) в полипропиленовой пробирке вместимостью 50 см 3 по 1,0 г гомогенизированной пробы. Далее обработку проб и подготовку к хроматографированию проводят по 7.2.1.
7.2.5 Обработка проб меда
7.3 Очистка подготовленных проб методом твердофазной экстракции
Картриджи для твердофазной экстракции кондиционируют на вакуумном устройстве для твердофазной экстракции, пропуская последовательно: 2 см 3 ацетонитрила и 2 см 3 деионизированной воды. Затем через картридж пропускают анализируемую пробу, полученную в соответствии с 7.2 (на всех этапах твердофазной экстракции, кроме этапов сушки, вакуум или избыточное давление не применяют). Промывают картридж 2 см 3 деионизированной воды, затем сушат картридж 10 мин. Далее элюируют аналиты 2 см 3 ацетонитрила. Элюат упаривают на нагревательном модуле в токе воздуха до 0,1 см 3 при температуре 40 °С.
7.4 Перерастворение и подготовка кхроматографированию
Для перерастворения и подготовки кхроматографированию объем полученного упаренного элюа-та в мерной пробирке вместимостью 10 см 3 доводят до 1 см 3 деионизованной водой и помещают на ультразвуковую баню на одну минуту. Полученный экстракт фильтруют через мембранный фильтр и используют для ВЭЖХ-МС/МС анализа.
8 Порядок выполнения измерений
8.1 ВЭЖХ/МС/МС анализ
Для определения остаточного содержания сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов проводят ВЭЖХ-МС/МС анализ в условиях, указанных в 6.4.
ВЭЖХ-МС/МС анализ выполняют в виде серии измерений, включающей:
— образец мобильной фазы А;
— образец, полученный в условиях подготовки проб, где вместо матрицы использовался 1,0 г деионизованной воды;
-образец, приготовленный ранее в соответствии с требованиями раздела 7, в зависимости от типа анализируемой матрицы;
— образцы с известным содержанием анализов для контроля стабильности градуировки.
Если остаточное содержание сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов в анализируемой пробе превышает значение максимального градуировочного уровня, то анализируемую пробу разводят в 10 или более раз мобильной фазой А и проводят повторные измерения.
8.2 Контроль качества измерений
8.2.1 Каждая серия измерений включает в себя несколько степеней подтверждения качества измерений.
8.2.2 10 мм 3 градуировочного раствора С4 (см. 6.2.4.7) вводят в инжектор хроматографа. Полученное соотношение сигнал/шум для каждого аналита должно быть не менее 10.
8.2.3 Для исключения контаминации пробы используемыми реагентами проводят обработку заведомо чистого образца в соответствии с разделом 7 в зависимости от типа анализируемой матрицы.
8.2.4 Для учета матричного эффекта при расчете остаточных содержаний нитроимидазолов, сульфаниламидов, пенициллинов и амфениколов используют матричную градуировку (см. 6.3).
8.2.5 Для исключения возможной контаминации реагентов, используемых в процессе подготовки проб, анализируемую пробу ткани заменяют 1,0 см 3 деионизованной воды.
9 Обработка результатов измерений
9.1 Расчеты остаточного содержания сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов и площади пика выполняются системой обработки данных в автоматическом режиме.
9.2 Вычисление площади пика проводят для двух дочерних ионов (таблица 2) для каждого сульфаниламида, нитроимидазола, пенициллина, амфеникола. Отклонения относительных ионных интенсивностей ионов в анализируемой пробе от относительных ионных интенсивностей ионов, полученных при анализе градуировочных растворов, не должны превышать значений, указанных в таблице 3.
Таблица 3 — Допустимые отклонения относительных ионных интенсивностей
Относительная ионная интенсивность
Максимально допустимые отклонения для ВЭЖХ-МС/МС