Что такое неструктурные белки

НЕСТРУКТУРНЫЕ БЕЛКИ

БЕЛКИ

Структура и молекулярная масса РНК-геномов вирусов животных

Таблица 4.

В зараженной клетке вирусный геном кодирует синтез двух групп белков: 1) структурных, которые входят в со­став вирусных частиц потомства, и 2) неструктурных, которые обслуживают процесс внутриклеточной репродукции вируса на разных его этапах, но в состав вирусных частиц не входят.

Структурные белки делятся на 2 группы:

1) капсидные белки, образующие капсид, т. е. футляр для нуклеиновой кислоты вируса (от лат. capsa — вме­стилище), и входящие в состав капсида геномные белки и ферменты;

2) суперкапсидные белки, входящие в состав суперкапсида, т. е. наружной вирусной оболочки.

Поскольку суперкапсид называют также «пеплос» (от греч. peplos — покров, мантия), эти белки называют пепломерами.

Просто организованные вирусы, представляющие собой нуклеокапсид, содержат только капсидные белки. Сложно организованные вирусы содержат капсидные и суперкап­сидные белки.

Капсидные белки. Первоначальное представление о том, что капсидные белки являются всего лишь инерт­ной оболочкой для вирусной нуклеиновой кислоты, сложи­лось на основании изучения наиболее просто организо­ванного вируса табачной мозаики, частица которого со­стоит из одной молекулы РНК и одного типа белка, образующего чехол для РНК.

Однако такое представление неправильно. Хотя основной функцией капсидных белков является функция защиты вирусного генома от неблагоприятных воздействий внешней среды, у многих вирусов в составе капсида есть белки и с другими функциями. Поэтому термин «капсид» далеко выходит за пределы представления о нем как о футляре или чехле для вирус­ной нуклеиновой кислоты.

В составе капсида некоторых вирусов (пикорнавирусы, паповавирусы, аденовирусы) содержатся белки, ковалентно связанные с вирусным геномом (геномные белки). Эти белки являются терминальными, т. е. соединенными с концом вирусной нуклеиновой кислоты. Функции их неразрывно связаны с функциями генома и их регуля­цией»

У ряда сложно организованных вирусов в составе кап­сида имеются ферменты, осуществляющие транскрипцию и репликацию вирусного генома — РНК и ДНК (РНК и ДНК-полимеразы), а также ферменты, модифицирую­щие концы иРНК. Если ферменты и геномные белки представлены единичными молекулами, то капсидные бел­ки представлены множественными молекулами. Эти белки и формируют капсидную оболочку, в которую у сложно организованных вирусов вставлены молекулы белков с дру­гими функциями.

Основным принципом строения капсидной оболочки вирусов является принцип субъединичности, т. е. построе­ние капсидной оболочки из субъединиц — капсомеров, обра­зованных идентичными полипептидными цепями. Правильно построенные белковые субъединицы — капсомеры возникают благодаря способности вирусных капсидных белков к самосборке. Самосборка объясняется тем, что упорядоченная структура — капсид имеет наименьшую свободную энергию по сравнению с неупорядоченными белковыми молекулами. Сборка капсидной оболочки из субъединиц запрограммирована в первичной структуре белка и происходит самопроизвольно или при взаимодействии с нуклеиновой кислотой.

Принцип субъединичности в строении вирусного капси­да является универсальным свойством капсидных белков и имеет огромное значение для вирусов. Благодаря этому свойству достигается огромная экономия генетического материала. Если бы капсидная оболочка была построена из разных белков, то на кодирование ее потребовалась бы основная часть генетической информации, заложенной в вирусном геноме. В действительности на кодирование, например, одной полипептидной цепи вируса табачной мозаики, расходуется менее 10 % генома. Далее, в меха­низме самосборки заложена возможность контроля за полноценностью вирусных полипептидов: дефектные и чу­жеродные полипептидные цепи при таком способе сборки вирионов будут автоматически отбрасываться.

Описанная способность к самосборке в пробирке и в зараженной клетке характерна только для простых виру­сов. Сборка сложно организованных вирусов является го­раздо более сложным многоступенчатым процессом, хотя отдельные ее этапы, например формирование капсидов и нуклеокапсидов, также основаны на самосборке.

Суперкапсидные белки. Гликопротеиды. Суперкапсидные белки, или пепломеры, располагаются в липопротеидной оболочке (суперкапсиде или пеплосе) сложно устроенных вирусов. Они либо пронизывают насквозь липидный бислой как, например, гликопротеиды альфа-вирусов (вируса леса Семлики), либо не доходят до внутренней поверхности. Эти белки являются типичны­ми внутримембранными белками и имеют много общего с клеточными мембранными белками. Как и последние, суперкапсидные белки обычно гликозилированы. Углевод­ные цепочки прикреплены к молекуле полипептида в опре­деленных участках. Гликозилирование осуществляют кле­точные ферменты, поэтому один и тот же вирус, проду­цируемый разными видами клеток, может иметь разные углеводные остатки: может варьировать как состав угле­водов, так и длина углеводной цепочки и место прикреп­ления ее к полипептидному ocтoвy.

У большинства вирусов гликопротеиды формируют «шипы» на поверхности вирусной частицы, длина которых достигает 7-10 нм. Шипы представляют собой морфоло­гические субъединицы, построенные из нескольких моле­кул одного и того же белка. Вирусы гриппа имеют два типа шипов, построенных соответственно из гемаглютинина и нейраминидазы. Парамиксовирусы также имеют два типа шипов, построенных соответственно из двух гликопротеидов (HN и F), рабдовирусы имеют только один гликопротеид и, соответственно, один тип шипов, а альфа-вирусы имеют два или три гликопротеида, формирующих один тип шипов.

Гликопротеиды являются амфипатическими молекула­ми: они состоят из наружной, гидрофильной части, кото­рая содержит на конце аминогруппу (N-конец), и погру­женной в липидный бислой, гидрофобной части, которая содержит на погруженном конце гидроксильную группу

Основной функцией гликопротеидов является взаимо­действие со специфическими рецепторами клеточной поверхности. Благодаря этим белкам осуществляется рас­познавание специфических клеточных рецепторов и прикрепление к ним вирусной частицы, т.е. адсорбция вируса на клетке. Поэтому гликопротеиды, выполняющие эту функцию, называют вирусными прикрепительными белка­ми.

Другой функцией гликопротеидов является участие в слиянии вирусной и клеточной мембран, т.е. в событии, ведущем к проникновению вирусных частиц в клетку. Ви­русные белки слияния ответственны за такие процессы, как гемолиз и слияние плазматических мембран соседних кле­ток, приводящие к образованию гигантских клеток, синцитиев и симпластов.

«Адресная функция» вирусных белков. Вирусы вызывают инфекционный процесс у относительно небольшого круга хозяев. Вирус должен «узнать» чувст­вительную клетку, которая сможет обеспечить продукцию полноценного вирусного потомства. Если бы вирус прони­кал в любую клетку, которая встретилась на его пути, это привело бы к исчезновению вирусов в результате деструк­ции «родительской» вирусной частицы и отсутствия вирус­ного потомства. В процессе эволюции у вирусов выраба­тывалась так называемая адресная функция, т.е. поиск чувствительного хозяина среди бесконечного числа нечув­ствительных клеток. Эта функция реализуется путем на­личия специальных белков на поверхности вирусной частицы, которые узнают специфический рецептор на по­верхности чувствительной клетки.

Вирусные прикрепительные белки. Прикрепительные белки могут находиться в составе уникальных органелл, таких как структуры отростка у Т-бактериофагов или фибры у аденовирусов, которые хорошо видны в электронном микроскопе; могут формировать морфологически менее выраженные, но не менее уникальные аранжировки белковых субъединиц на поверхности вирусных мембран, как, например, шипы у оболочечных вирусов, «корону» у коронавирусов.

Просто организованные вирусы животных содержат прикрепительные белки в составе капсида. У сложно организованных вирусов эти белки входят в состав суперкапсида и представлены множественными молекулами.

Неструктурные белки изучены гораздо хуже, чем структурные, поскольку их выделяют не из очищенных препаратов вирусов, а из зараженных клеток, и возникают трудности в их идентификации и очи­стке от клеточных белков.

К неструктурным белкам относятся:

1) предшественники вирусных белков, которые отлича­ются от других неструктурных белков нестабильностью в зараженной клетке в результате быстрого нарезания на структурные белки;

2) ферменты синтеза РНК и ДНК (РНК и ДНК-полимеразы), обеспечивающие транскрипцию и реплика­цию вирусного генома;

4) ферменты, модифицирующие вирусные белки, на­пример протеиназы и протеинкиназы.

Однако многие неструктурные белки при ряде вирус­ных инфекций еще не идентифицированы и функции их не определены.

Типы структурных и неструктурных белков просто и сложно устроенных вирусов и их функции показаны на схеме 1.

Источник

СОДЕРЖАНИЕ

Структурные белки вирусов

Большинство структурных белков вируса являются компонентами капсида и оболочки вируса.

Капсид

Вирусный конверт

Вирусные гликопротеины играют решающую роль в слиянии вируса с клеткой. Слияние вируса с клеткой начинается, когда вирусные гликопротеины связываются с клеточными рецепторами.

Слитые белки вирусной мембраны

Для слияния вирусной оболочки с клеточной мембраной требуется большая энергия. Слитые белки вирусной мембраны действуют как катализаторы, преодолевая этот высокий энергетический барьер. После связывания вирусного гликопротеина с клеточными рецепторами слитые белки вирусной мембраны претерпевают изменение структурной конформации. Это изменение конформации затем способствует дестабилизации и слиянию вирусной оболочки с клеточной мембраной, позволяя петлям слияния (FL) или гидрофобным слитым пептидам (FP) на вирусной оболочке взаимодействовать с клеточной мембраной. Большинство слитых белков вирусной мембраны после слияния будут иметь конформацию, подобную шпильке, в которой FLs / FP и трансмембранный домен находятся на одной стороне белка.

Вирусные гликопротеины и их трехмерные структуры до и после слияния позволили обнаружить широкий спектр структурных конформаций. Слитые белки вирусной мембраны были сгруппированы в четыре различных класса, и каждый класс идентифицируется по характерным структурным конформациям:

Вирусные неструктурные белки

Формирование репликона

Иммуномодуляция

Вирусные регуляторные и вспомогательные белки

Вирусные регуляторные и вспомогательные белки выполняют множество функций. Эти вирусные белки контролируют и влияют на экспрессию вирусных генов в вирусном геноме, включая скорость транскрипции вирусных структурных генов. Вирусные регуляторные и вспомогательные белки также влияют и регулируют клеточные функции клетки-хозяина, такие как регуляция генов и апоптоз.

В ДНК-вирусах и ретровирусах вирусные регуляторные белки могут усиливать транскрипцию вирусных генов, аналогично эти белки также могут усиливать транскрипцию генов клеток-хозяев.

Вирусные вспомогательные белки, также известные как вспомогательные белки, кодируются геномом ретровирусов. Большинство дополнительных белков вируса выполняют свои функции только в определенных типах клеток. Кроме того, они не имеют большого влияния на репликацию вируса. Однако в некоторых случаях для поддержания репликации вирусов потребуется помощь (и функционирование) вирусных дополнительных белков.

Эндогенные ретровирусные белки

Источник

Что такое неструктурные белки

Определение в крови иммуноглобулинов IgG к белкам вируса гепатита С, которое используется для диагностики этого заболевания.

Антитела к белкам гепатита С;

Antibodies to structural and non-structural proteins of HCV;

Иммуноферментный анализ (ИФА).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Общая информация об исследовании

Гепатит С – вирусное заболевание печени, отличительной чертой которого является бессимптомное течение и высокая частота прогрессии в хронический гепатит, цирроз печени и гепатоцеллюлярную карциному. Основной путь передачи гепатита С – через кровь и ее компоненты. Группы риска по заражению ВГС:

Следует отметить, что по крайней мере в 20 % случаев источник заражения установить не удается. В России наблюдается рост заболеваемости гепатитом С: в период с 1999 по 2011 гг. заболеваемость хроническим ВГС выросла в 3 раза. Как правило, пациенты с ВГС не догадываются о своем заболевании.

Вирус гепатита С (ВГС) – РНК-вирус, принадлежащий семейству Flaviviridae. При транскрипции его генома образуется единый белок длиной около 3000 аминокислот, который затем разрезается с помощью пептидаз клетки-хозяина и вирусных пептидаз с образованием структурных и неструктурных белков:

В ответ на заражение вирусом гепатита С в организме человека начинают вырабатываться антитела – иммуноглобулины M и G, которые можно исследовать для диагностики гепатита. Следует отметить, что при гепатите С синтез иммуноглобулинов М может наблюдаться на разных стадиях заболевания, как при остром, так и при хроническом гепатите, и поэтому не имеет никакого диагностического значения. Это важное отличие диагностики гепатита С от гепатита В (выявление иммуноглобулинов М при гепатите В наблюдается только в острую стадию). Таким образом, все серологические тесты для диагностики гепатита С основаны на выявлении иммуноглобулинов G к белкам этого вируса.

Структурные и неструктурные белки иммуногенны в разной степени. Показано, что наиболее выраженными иммуногенными свойствами обладают следующие белки (в скобках указан процент пациентов с хроническим гепатитом С, у которых в крови обнаруживаются антитела к указанному белку):

Менее иммуногенны белки E2 (31 %), NS4A(28 %) и E1 (22 %). NS2 и NS5B имеют очень слабые иммуногенные свойства, и антитела к ним у пациентов с ВГС выявляются редко.

Антитела к ВПС могут быть определены в крови приблизительно через 8 недель после первичного заражения. Ложноотрицательные результаты могут наблюдаться у людей с иммунодефицитом (например, ВИЧ-инфицированных), почечной недостаточностью и эссенциальной смешанной криоглобулинемией. Ложноположительные результаты также встречаются.

Вирусы гепатита С неоднородны по генетическому составу. На этом основании выделяют 6 генотипов ВПГ, геномы которых различаются на 30-35 %, и множество подтипов, различающихся на 20-25 %. В восточной Европе и США чаще встречаются генотипы 1a и 1b, тогда как для других стран характерны другие генотипы (например, Египет – генотип 4, Южная Африка – генотип 5). Показано, что иммунный ответ пациентов, инфицированных разными генотипами ВГС, различается. Это особенно справедливо в отношении антител к белкам E1, E2, NS3, NS4A и NS5A.

Качественный и количественный состав антител к ВГС у пациента остается достаточно постоянным в течение заболевания, в том числе и после проведенного лечения.

Антитела к гепатиту С – чувствительный, но недостаточно специфичный метод диагностики этого заболевания. Поэтому серологические тесты – это скрининговые тесты диагностики гепатита. При получении положительного результата исследования антител на гепатит С обязательно проводят подтверждающее исследование – анализ на РНК вируса с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР). Кроме того, при подтверждении диагноза «гепатит С» может понадобиться генотипирование ВГС и гистологическое исследование печени или неинвазивные методы определения состояния печени (такие как ФиброМакс).

Для чего используется исследование?

Когда назначается исследование?

Что означают результаты?

Выдается по компонентам:

IgG к антигену core

IgG к антигену NS3

IgG к антигену NS4

IgG к антигену NS5

Что может влиять на результат?

14 Гистологическое исследование гепатобиоптата (биоптата печени) с использованием стандартных методик

Кто назначает исследование?

Инфекционист, терапевт, врач общей практики.

Источник

Что такое неструктурные белки

У РНК-содержащих ретровирусов сначала происходит обратная транскрипция генома в ДНК, затем ее интеграция в клеточные хромосомы и лишь после этого транскрипция генов.

Цитопатические эффекты при вирусных инфекциях разнообразны, они определяются как вирусом, так и клеткой и сводятся к разрушению клетки (цитолитический эффект), сосуществованию вируса и клетки без гибели последней (латентная и персистирующая инфекция) и трансформации клетки.

Продукция и секреция цитокинов относятся к самым ранним событиям, сопутствующим взаимодействию микроорганизмов с макрофагами. Этот ранний неспецифический ответ на инфекцию важен по нескольким причинам: он развивается очень быстро, поскольку не связан с необходимостью накопления клона клеток, отвечающих на конкретный антиген; ранний цитокиновый ответ влияет на последующий специфический иммунный ответ.

Интерферон активирует макрофаги, которые затем синтезируют интерферон-гамма, ИЛ-1, 2, 4, 6, ФНО, в результате макрофаги приобретают способность лизировать вирус-инфицированные клетки.

Интерферон-гамма является специализированным индуктором активации макрофагов, который способен индуцировать экспрессию более 100 разных генов в геноме макрофага.

Пик продукции цитокинов после стимуляции макрофагов наблюдается через 1-2,6,18-48 ч, а пик продукции интерферон-гамма наступает через 20 ч после первого выхода цитокина из клетки. Поскольку интерферон-гамма ингибирует миелопоэз, то нормализация числа нейтрофилов после элиминации инфекта связана с системой регуляции нейтропоэза. Через 6 ч после стимуляции интерферон-альфа для выполнения своих функций NK-rклетки (активность которых регулируется ИЛ-1, 4, 2) продуцируют гамма-интерферон, в результате чего происходит лизис инфицированных клеток.

При антигенной стимуляции клеток трансдукция сигнала с активированного рецептора на генетический аппарат осуществляется с помощью внутриклеточных регуляторных систем, компоненты которых (белки мембран, ферментов, хроматина) связываются с чувствительными к ним последовательностями ДНК. После связывания цитокина (интерферон) с поверхностными клеточными мембранными рецепторами происходит активация ферментов протеинкиназы-С (ПКС), тирозинкиназы, ц-АМФзависимой протеинкиназы, серин-треонинкиназы. Интерферон-альфа активирует tyk 2 и jak 1-киназы, а интерферон-гамма активирует jak 1 и 2-киназы. Далее факторы транскрипции перемещаются в ядро клетки и связывают гены раннего ответа.

ПК-дс выполняет регуляторную роль в системе клеточной пролиферации на уровне факторов трансляции и активации ряда генов цитокинов. Вероятно, существует связь между подавлением транскрипции мРНК и ПК-дс, угнетением общего синтеза клеточного белка при вирусных инфекциях и накоплением в ядрах клеток белка нуклеокапсида и белка NSP2. Фрагментация клеточных хромосом, наблюдающаяся на ранних сроках вирусной инфекции, может быть одной из причин подавления экспрессии генов, участвующих в противовирусном ответе.

В последние годы показано, что ИЛ- 12, относящийся к провоспалительным цитокинам, является ключевым для усиления клеточно-опосредованного иммунного ответа и инициации эффективной защиты против вирусов.

Средства терапии гриппа и ОРЗ можно разделить на этиотропные, иммунокорригирующие, патогенетические и симптоматические. Приоритет принадлежит этиотропным препаратам, действие которых направлено непосредственно на возбудитель инфекции. Все препараты этиотропного действия целесообразно рассматривать с учетом их точек приложения в цикле репродукции вирусов гриппа и других ОРЗ.

Применение химиопрепаратов для профилактики и лечения гриппа и ОРЗ относится к базовой терапии и является общепризнанным мировым стандартом. Многолетние клинические исследования достоверно выявили их высокую лечебно-профилактическую значимость. Химиотерапевтические средства представлены тремя основными группами: это блокаторы М_2-каналов (амантадин, ремантадин); ингибиторы нейраминидазы (занамивир, озельтамивир) и ингибиторы протеаз (амбен, аминокапроновая кислота, трасилол). Препараты оказывают прямое антивирусное действие, нарушая различные фазы репликативного цикла вирусов. Несколько особняком стоит группа вирулицидных препаратов, применяемых местно для предотвращения адсорбции и проникновения вирионов в клетки.

Источник

Статьи

Антителогенез у больных HCV-инфекцией

В.И. Лучшев, Т.Я. Чернобровкина, С.Н. Жаров

Кафедра инфекционных болезней, тропической медицины и эпидемиологии, ГОУ ВПО «РГМУ МЗ РФ» (зав. кафедрой – проф. В.И. Лучшев)

Из литературных источников известно, что геном вируса гепатита С (ВГС) кодирует три структурных белка: протеин С (core, ядерный), Е1 и Е2 (протеины оболочки) и четыре неструктурных белка: NS2, NS3, NS4 (A,B), NS5 (A,B). К каждому из белков в организме человека вырабатываются антитела, циркулирующие в крови. В настоящее время предлагается широкий спектр современных иммунологических и молекулярно-биологических диагностических тест-систем, а также гистологических исследований печени для выявления антительных, антигенных маркеров и RNA вируса гепатита С, различающихся своей чувствительностью и специфичностью [1, 2, 5, 8, 10]. Наиболее ранним маркером инфекции является обнаружение в сыворотке крови RNA-HCV через 1-3 недели от момента инфицирования. Однако, положительная RNA-HCV в сыворотке крови регистрируется только у 25% инфицированных ВГС на фоне нормальных уровней активности трансаминаз, поэтому чаще заболевание длительное время не диагностируется [2].

Обычно антитела к структурным белкам выявляются в сыворотке крови через 6-8 недель от инфицирования, причем они не обладают вируснейтрализующими свойствами, достаточными для элиминации вируса. Именно белки внешней оболочки (Е1 и Е2) ВГС имеют участки с высокой частотой аминокислотных замен, в результате которых образуются большое число генотипов и субтипов. Антитела к неструктурным белкам определяются в сыворотке крови несколько позже (через 10 недель от начала болезни) [3, 4, 5, 6]. В литературе появляется все больше данных о предполагаемых функциях и прогностическом значение как антигенов так и антител к ВГС. Считают, что нуклеокапсидный белок активирует апоптоз инфицированных клеток, способствует увеличению числа рецепторов апоптоза на клеточной мембране гепатоцита и повышению чувствительности клетки к проапоптотическим стимулам. Так, за чувствительность к интерферону возможно отвечает NS5 (A,B) белок. Высокий титр антител к поверхностным (структурным) белкам в острой фазе заболевания характеризует благоприятное течение HCV-инфекции [3]. Отсутствие антител к NS5 белку у больных ОГС характерно для периода реконвалесценции [5]. Выявление анти-NS4 ассоциируется с поздними морфологическими стадиями болезни – циррозом печени [4, 7, 9]. Диагностическая интерпретация антител к NS3 неструктурному белку по данным литературы неоднозначна. Кроме того, данные о маркерах вируса С изучались в образцах сыворотки крови больных в основном при моно инфекции HCV. Однако, доказанная репликация ВГС не только в клетках печени, но и в клетках эпителия, кератиноцитах, лимфоидных клетках и даже клетках крови послужила основанием для исследования маркеров ВГС на эритроцитах крови больных [7, 11].

Поэтому целью нашей работы являлось усовершенствование дифференциальной диагностики НСV-инфекции на основании исследования антител к структурным и неструктурным белкам ВГС не только в сыворотке, но и на эритроцитах крови больных.

Материалы и методы

Изучение клинической картины, лабораторных показателей и антителогенеза проводилось у 57 больных, страдающих HCV-инфекцией и микст-инфекцией HCV + HBV. Первую группу пациентов получавших базисную терапию, составили 17 больных с острым гепатитом С (ОГС), вторую 15 с обострением хронического гепатита С (ХГС), третью 25 пациентов с микст-инфекцией HCV+HBV по типу супер-инфекции острый гепатит В на фоне хронического гепатита С (ОГВ+ХГС). Пациенты находились на стационарном лечении в Инфекционной клинической больнице №3 г. Москвы (главный врач – Лазуткина Л.И.).

Верификацию вирусных гепатитов проводили с использованием иммуноферментного анализа (ИФА) и полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Определение спектра антител класса IgM и IgG к вирусу гепатита С в сыворотке и на эритроцитах крови проводилось методом иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием тест-систем «ИФА-АНТИ-HCV-СПЕКТР» и «ИФА-АНТИ-HCV-СПЕКТР- GM» НПО «Диагностические системы» (г. Нижний Новгород). Исследование крови пациентов проводилось в день госпитализации, через 1 месяц. ИФА проводился строго по инструкции прилагаемой к каждой тест-системе с поэтапным добавлением в лунки планшета готовых реагентов. В основе метода лежит реакция рекомбинантных антигенов, сорбированных раздельно на стрипах полистиролового планшета с антителами в исследуемых сыворотках и на эритроцитах крови больных HCV-инфекцией. Венозную кровь брали из локтевой вены натощак и центрифугировали 5 минут с 1500 оборотов в минуту. Сыворотку крови отделяли, помещали в пластиковые контейнеры и хранили в морозильной камере. Верификацию вирусных гепатитов проводили с использованием иммуноферментного анализа (ИФА) и полимеразной цепной реакции (ПЦР). Оставшийся осадок так же помещали в морозильную камеру. Перед постановкой реакции, сыворотки крови пациентов размораживались, а осадок крови трижды центрифугировали с физиологическим раствором (0,9% NaCl) в течение 5 минут с частотой 1500 оборотов в минуту с целью приготовления отмытых разрушенных эритроцитов.

Учет результатов проводили спектрофотометрически при длине волны 450 нм. Рассчитывалась критическая оптическая плотность (ОП) каждого антигена по формуле:

ОП крит. core-Ag = среднее значение ОП К- (core) + 0,2

Реакция считалась положительной при превышении результата над показателем критической ОП не менее чем на 20%.

ИФА проводился в лаборатории кафедры инфекционных болезней, тропической медицины и эпидемиологии РГМУ на базе клинической инфекционной больницы №3.

Результаты и обсуждение

При исследовании спектра маркеров HCV-инфекции в сыворотке и на эритроцитах крови, в условиях динамического наблюдения за больными получены следующие результаты.

У всех больных с моно-HCV-инфекцией при госпитализации в стационар обнаруживаются антитела к ядерному белку ВГС (100%) и в несколько меньшем проценте (84%) у пациентов с микст-инфекцией ОГВ+ХГС. В динамике заболевания сохраняется 100% выявляемость этих антител во всех группах (табл. 1).

Таким образом, наличие антител к core-белку в сыворотке крови практически у всех больных при поступлении в стационар и после базисной терапии может свидетельствовать о наличии у пациента только HCV-инфекции, не указывая на длительность течения и период заболевания. Следовательно, характерный спектр антител к структурному core-белку в сыворотке крови больных будет недостаточным для дифференциальной диагностики HCV-инфекции.

Параллельное определение спектра антител на эритроцитах крови показало, что в них сохраняется наибольшая выявляемость антител к core-белку у всех больных в период разгара и в период реконвалесценции у пациентов с ХГС и микст-инфекцией, в противоположность ОГС (20%, р Задать вопрос Оставить отзыв

Источник