Что такое лечебно профилактические сыворотки и иммуноглобулины

Иммуноглобулин человека нормальный : инструкция по применению

Инструкция

Препарат представляет собой концентрированный раствор иммунологически активной белковой фракции, выделенной методом фракционирования этиловым спиртом при температуре ниже 0 °C из плазмы крови здоровых доноров. Для изготовления серии иммуноглобулина используют плазму, полученную не менее чем от 1000 здоровых доноров, индивидуально проверенных на отсутствие поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg), антител к вирусу гепатита С и вирусам иммунодефицита человека ВИЧ-1 и ВИЧ-2.

Концентрация белка в иммуноглобулине составляет от 9,5 до 10,5 %.

Стабилизатор глицин в концентрации (2,25±0,75) %. Препарат не содержит консервантов и антибиотиков.

Прозрачная или слегка опалесцирующая жидкость, бесцветная или со слабо-желтой окраской. В процессе хранения допускается появление незначительного осадка, исчезающего после легкого встряхивания препарата при температуре (20 ± 2) °C.

Количественный и качественный состав

Электрофоретическая однородность: фракция иммуноглобулинов должна составлять не менее 97 % от общего белка.

Молекулярные параметры: содержание мономеров и димеров IgG должно быть не менее 85 %. Полимеров — не более 10 %, фрагментов — не более 5 %.

Фракционный состав: на иммуноэлектрофореграмме должна выявляться интенсивная дуга преципитации IgG и не более четырех дополнительных дуг, соответствующих IgA, IgM и двум другим иммунологически неактивным фракциям.

Фармакотерапевтическая группа

Иммунные сыворотки и иммуноглобулины. Иммуноглобулины человеческие нормальные для внесосудистого введения.

Действующим началом являются иммуноглобулины, обладающие активностью антител различной специфичности.

Максимальная концентрация антител в крови достигается через 24-48 часов; период полувыведения антител из организма составляет 3-4 недели. Препарат обладает также неспецифической активностью, повышая резистентность организма.

Иммуноглобулин человека нормальный, производства НПО «Микроген», может предупредить или модифицировать корь у восприимчивых лиц (не вакцинированных и не болевших раньше корью) при контакте с больными Цены в аптеках

Источник

СЫВОРОТКИ иммунные

Сыворотки иммунные (син. антисыворотки) — препараты крови животных или человека, содержащие антитела; используются для диагностики, лечения и профилактики различных заболеваний.

Ж. Борде, изучая в лаборатории И. И. Мечникова действие противохолерной сыворотки, установил, что холерный вибрион под ее влиянием теряет свою подвижность. В 189(5 г. Грубер и Дархем (M. Gruber, H. E. Durham) показали, что в результате иммунизации животных сыворотки их крови приобретали свойства агглютинировать соответствующие микробы. Так были открыты антитела — агглютинины. В 1897 г. Краус (R. Kraus) установил, что сыворотки крови иммунизированных животных действуют на фильтраты соответствующих бульонных культур: в прозрачном фильтрате выпадает осадок (преципитат). В 1899 г. Ф. Я. Чистович первым получил преципитины к белкам животного происхождения.

В 1898 г. Ж. Борде открыл у морских свинок, иммунизированных кроличьими эритроцитами, антитела — гемолизины и гемагглютинины. В 1900 г. И. И. Мечников, впрыскивая морским свинкам эмульсию селезенки или брыжеечных лимфатических узлов кролика, получил специфические сыворотки — антилейкоцитарные сыворотки. Вскоре были выделены сыворотки против других клеток организма. Т. о., получение иммунных сывороток основано на свойстве антигенов (см.) вызывать в организме образование антител (см.).

Иммунные сыворотки получают от иммунизированных животных или человека, а также от реконвалесцентов, в крови к-рых содержатся антитела после перенесенной инфекционной болезни (сыворотки реконвалесцентов). Сыворотки могут содержать так наз. нормальные антитела, напр. аллоантитела, или изоантитела, образующиеся у человека или животного в течение жизни и не зависящие от искусственной иммунизации (см.). В результате многократной иммунизации получают С., содержащие антитела в высоких титрах — гипериммунные сыворотки. Различают диагностические и лечебно-профилактические сыворотки.

Содержание

Диагностические сыворотки

Диагностические сыворотки, как правило, содержат антитела в более высоком титре, чем лечебно-профилактические. Их получают как от мелких лаб. животных (кроликов, морских свинок), иммунизированных убитыми микроорганизмами, антигенами, анатоксинами, так и от крупных (коз, лошадей, баранов), если необходимо большое количество сыворотки. Диагностические С. применяют в различных иммунологических реакциях для установления вида, подвида или серотипа (серовара) возбудителя инфекционной болезни, определения различных антигенов в биол. жидкостях. При этом используют Сыворотки, содержащие антитела, называемые в зависимости от характера иммунол. реакции. Так, в реакции агглютинации — агглютинины, в реакции преципитации — преципитины, в реакции связывания комплемента — комплементе вязывающпе антитела, в иммунофлюоресценции — флюоресцирующие антитела, в иммунорадиомет-рическом методе (см. Радиоиммунологический метод) — антитела, меченные радиоактивным изотопом, в иммуноферментном методе (см. Энзим-иммунологический метод) — антитела, меченные ферментом, в электронно-микроскопической иммуногистохимии — антитела, меченные ферментом или ферритином, и т. д. Поэтому в зависимости от характера иммунол. реакции различают агглютинирующие, преципитирующие, флюоресцирующие, гемолитические, меченные изотопами, ферментами, и другие диагностические сыворотки.

Среди диагностических С. различают антимикробные, к к-рым относятся антибактериальные и антивирусные, а также антитоксические С.

Антибактериальные сыворотки обычно используют как агглютинирующие. По степени специфичности их разделяют на неадсорбированные (нативные) и адсорбированные (поливалентные, содержащие антитела к нескольким антигенам или нескольким детерминантным группам антигена, и монорецепторные). Неадсорбированные сыворотки содержат перекрестно реагирующие антитела, т. к. различные микробы могут иметь сходные антигены. К ним относятся сыворотки, предназначенные для обнаружения нек-рых сальмонелл (напр., S. typhi, S. paratyphi, S. typhimurium, S. enteritidis, S. anatum, S. newport, S. choleraesuis), шигелл и эшерихий. Неадсорбированные агглютинирующие сыворотки используют для постановки развернутой реакции агглютинации с целью идентификации микробов (см.). При этом для точной серологической идентификации возбудителя (см. Серологические исследования) важно учитывать, чтобы реакция шла до титра или половины титра сыворотки. Неадсорбированные сыворотки из-за своей относительно невысокой специфичности находят меньшее применение, чем адсорбированные.

Адсорбированные поливалентные сыворотки способны агглютинировать несколько родственных бактерий, имеющих общий антиген. Адсорбированные монорецепторные сыворотки содержат антитела только против определенного антигена, т. е. они обладают высокой специфичностью (диагностические типоспецифические сыворотки). Их получают избирательной адсорбцией антител (см. Кастеллани метод). Адсорбированные сыворотки используют в реакции агглютинации (см.) на предметном стекле, чаще для идентификации возбудителей, относящихся к сем. Enterobacteriaceae, напр, для идентификации энтеропатоген-ных эшерихий применяют поливалентные и типовые ОК-сыворотки, для определения принадлежности возбудителя к роду сальмонелл — агглютинирующую адсорбированную поливалентную сальмонеллезную О-сыворотку (групп А, В, С, Д, Е), для определения серол. группы и серотипа возбудителя — отдельные адсорбированные О-, а затем Н-сыворотки. Для определения в исследуемом материале антигенов, напр. ботулинических токсинов или

О-брюшнотифозного антигена, используют соответствующие антитела сыворотки, сорбированные на эритроцитах,— так наз. антительные эритроцитарные диагностикумы (см. О-агглютинация).

Антивирусные диагностические Сыворотки используют в различных реакциях иммунитета, напр, реакции торможения гемагглютинации (см. Гемагглютинация), реакции связывания комплемента (см.), реакции иммунофлюоресценции (см.) и др. К антивирусным сывороткам в зависимости от вида вируса предъявляются особые требования. Разнообразие источников антивирусных сывороток связано с наличием в них неспецифических ингибиторов, к-рые могут подавлять и маскировать рецепторы вирусов. Антивирусные сыворотки очищают от термолабильных ингибиторов прогреванием при t° 56° в течение 30 мин., а от термостабильных ингибиторов ферментированием, воздействием углекислотой и др. в зависимости от природы вируса. Кроме этого, определяют наличие неспецифических агглютининов. С целью подавления бактериофагов применяют антифаговые С. В лаб. практике их добавляют к питательным средам для освобождения бактерий от их бактериофагов.

Из антитоксических диагностических сывороток наиболее часто используют сыворотки для обнаружения ботулинических токсинов в реакции нейтрализации in vivo (см. Ботулизм, лабораторная диагностика) и идентификации токсина возбудителя дифтерии в реакции преципитации (см. Дифтерия).

Преципитирующие сыворотки используют в реакциях преципитации (см.) для определения растворимых антигенов микробного, растительного или животного происхождения, определения аутоантител, С-реактивного белка, для диагностики инф. болезней, выявления видовой принадлежности белка крови, обнаружения определенных веществ в продуктах при подозрении на фальсификацию.

Флюоресцирующие (люминесцирующие) сыворотки представляют собой глобулиновую фракцию иммунной сыворотки крови животных, меченную флюоресцирующими красителями — флюорохромами (см.). Их применяют для обнаружения микробов методом прямой иммунофлюоресценции (см.) в патологическом материале и при экспериментальных исследованиях. С аналогичной целью используют также меченные флюорохромами антиглобулиновые и антикомплементарные сыворотки при непрямой иммунофлюоресценции.

В клин, иммунологии широко применяют диагностические сыворотки для определения группы крови (см.), проведения тканевого типирования, для характеристики иммунол. статуса организма. Группы крови по системе AB0 определяют с помощью стандартных гемагглютинирующих сывороток, приготовленных из крови человека. Они специфичны, т. к. содержат определенные аллоантитела — альфа-, бета- или альфа + бета-антитела. Сыворотка крови группы АВ (IV) этих антител не содержит.

Для тканевого типирования при аллогенных трансплантациях и гемотрансфузиях (см. Иммунитет трансплантационный, антигены гистосовместимости) используют так наз. тестовые HLA- и NA-, NB-реактивы. HLA-реактив получают от лиц, сенсибилизированных соответствующим антигеном (напр., сыворотка крови женщин, сенсибилизированных в период беременности, или сыворотки крови иммунизированных доноров). Антитела определяют с помощью лимфоцитотоксической пробы (см. Лейкоцитарные тесты) или реакции лейкоагглютинации (см. Агглютинация).

Для определения иммунологического статуса организма применяют моноспецифические сыворотки к иммуноглобулинам человека классов G, А, М, к-рые получают от кроликов или овец, иммунизированных очищенными IgG, IgA, IgM человека. Эти сыворотки для удаления гетерологичных антител «истощают» соответствующими адсорбентами. Поэтому С. содержат только антитела против иммуноглобулинов соответствующего класса, т. е. являются моноспецифическими. С их помощью определяют тип и количество иммуноглобулинов для оценки нек-рых иммунодефицитных состояний (см. Иммунологическая недостаточность), качество препарата иммуноглобулина (см.), а также неполные антитела, появляющиеся при нек-рых инф. болезнях. Эти сыворотки используют в реакции радиальной иммунодиффузии по Манчини (см. Иммунодиффузия).

В таблице 1 дан перечень основных диагностических иммунных сывороток, их получение, применение в клинической иммунологии, форма выпуска.

Лечебно-профилактические сыворотки

К ним относятся антитоксические, антибактериальные, антивирусные сыворотки, а также иммуноглобулины. Антитоксические сыворотки получают методом гипериммунизации крупных животных (обычно лошадей) путем парентерального введения нарастающих доз анатоксинов, затем соответствующих экзотоксинов (см. Антитоксины). Антитоксические сыворотки применяют для пассивной иммунизации (см.).

Антитоксические сыворотки используют для лечения и профилактики токсинемических инфекций, в основе к-рых лежит действие на организм экзотоксинов бактерий — возбудителей столбняка, ботулизма, дифтерии, газовой гангрены, стафилококковых инфекций. Антитоксическими сыворотками являются и сыворотки, содержащие антитела против ядов змей, пауков, ядов растительного происхождения. Антитела антитоксических сывороток нейтрализуют действие соответствующих токсинов, обеспечивая тем самым леч.-проф. эффект.

Антитоксические сыворотки, полученные от гипериммунизированных животных, очищают и концентрируют (с целью удаления неактивных балластных белков); контролируют их физические свойства, стерильность, апирогенность, безвредность, специфическую активность, количество белка, значение pH и наличие остаточного сульфата аммония. Специфическая активность антитоксических сывороток выражается в международных единицах (ME). За единицу принимают минимальное количество сыворотки, к-рое нейтрализует стандартную единицу токсина. Для сывороток, еще не имеющих международных стандартов, утверждены национальные стандарты — антитоксические единицы (АЕ).

Определение специфической активности антитоксических сывороток производят двухэтапным титрованием. На первом этапе устанавливают опытную дозу токсина с помощью стандартной антитоксической сыворотки. На втором этапе определяют активность испытуемой антитоксической сыворотки посредством опытной дозы токсина (см. Антитоксины).

Стандартные образцы антитоксических сывороток проходят контроль в Государственном НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л. А. Тарасевича и рассылаются производственным предприятиям, выпускающим сыворотки. Стандартные сыворотки соответствуют принятым международным стандартам, что облегчает возможность сопоставления свойств сывороток, изготовленных в разных странах.

Антибактериальные сыворотки получают из крови лошадей или волов, гипериммунизированных соответствующими убитыми бактериями или их антигенами. Они не нашли широкого применения с лечебными или профилактическими целями из-за наличия более эффективных антимикробных средств. Из антибактериальных сывороток иногда применяют гетерогенные иммуноглобулины (противосибиреязвенный гамма-глобулин и противолептоспирозный гамма-глобулин).

Антивирусные сыворотки (гетерогенные иммуноглобулины) получают из крови животных, иммунизированных вакцинными штаммами вирусов или соответствующими вирусами. Их очищают методом спиртового осаждения при низкой температуре. Наиболее широкое применение получил гамма-глобулин против клещевого энцефалита, антирабический гамма-глобулин и др. (см. Иммуноглобулины).

Иммуноглобулины, полученные из крови человека (гомологичные иммуноглобулины), являются, за исключением нормального иммуноглобулина, иммуноглобулинами направленного действия. Преимуществом гомологичных иммуноглобулинов перед гетерологичными является слабая реактогенность и более длительное циркулирование антител в организме (в течение 30— 40 дней). Получают гомологичные иммуноглобулины путем фракционирования этиловым спиртом при температуре ниже нуля (по методу Кона). Наибольшее значение в клин, практике имеют иммуноглобулины с максимально сниженной анти комплементарной активностью, к-рые используют для внутривенного введения. Таким препаратом является иммуноглобулин нормальный человеческий для внутривенного введения. В иммуноглобулиновых препаратах для внутривенного введения стремятся удалить способность Fc-области молекул иммуноглобулинов активировать систему комплемента, а также предотвратить агрегацию молекул иммуноглобулинов. Применяется при различных формах иммунологической недостаточности (см.).

Среди различных иммуноглобулинов направленного действия, или гамма-глобулинов направленного действия, выделяют антирезусный иммуноглобулин — aHTn-Rh0(D), к-рый используют для иммунопрофилактики гемолитической болезни новорожденных (см.). Его вводят первородящим резус-отрицательным женщинам в послеродовой период или после аборта; при повторных беременностях у таких женщин рождаются здоровые резус-положительные дети. Источником получения препарата может быть гипериммунная плазма доноров, а также плазма женщин, сенсибилизированных резус-антигеном естественным путем во время повторных беременностей.

Иммуноглобулином направленного действия является также анти-лимфоцитарный (гетерогенный) иммуноглобулин, входящий в состав антилимфоцитарной сыворотки (см.), содержащей различные антитела к лимфоидным клеткам, преимущественно к лимфоцитам. Наибольшей иммунодепрессивной активностью обладает антилимфоцитарная сыворотка, полученная путем иммунизации животных клетками тимуса и лимфоцитами грудного лимфатического протока. Она широко используется при трансплантации жизненно важных органов, в первую очередь почки.

Антиретикулярную цитотоксическую сыворотку (сыворотку Богомольца) получают из сыворотки крови лошади, иммунизированной тканью селезенки или костного мозга человека. Она содержит антитела-цитотоксины, активные по отношению к клеткам этих органов. Применение антиретикулярной цитотоксической сыворотки особенно целесообразно при длительно не заживающих язвах и ранах, а также при наличии медленно рассасывающихся воспалительных очагов.

В табл. 2 дан перечень основных препаратов иммуноглобулинов и антитоксических сывороток, источник их получения, применение и способ введения.

Получение иммунных сывороток включает: подготовку соответствующего иммуногена, т. е. вещества, стимулирующего продукцию антител; иммунизацию животных; контроль полученных сывороток. Для получения сывороток против таких гаптенов, как фармакол. препараты или низкомолекулярные гормоны, применяют в качестве иммуногена, или иммунизирующего препарата, конъюгат гаптен-носитель. Степень чистоты белковых иммуногенов проверяют с помощью иммунохимических и физико-химических исследований. Иммунизация является одним из наиболее вариабельных процессов при получении сывороток, т. к. доза иммуногена может влиять на свойства (напр., специфичность) образующихся антител. Малые дозы вводимого антигена позволяют экономить расход иммуногенных препаратов, индуцируют появление авидных антител в высоком титре. При небольших дозах антигена в организм вводятся и небольшие количества посторонних примесей, в результате чего не образуются побочные антитела. Для стимуляции антителообразования иммуногены смешивают с адъювантами (см.), напр. адъювантом Фрейнда. Помимо стимулирующей функции, адъюванты выполняют и депонирующую функцию в отношении иммуногена. Кроме дозы антигена, важно также учитывать степень его чистоты, способ, сроки и последовательность введения. Выбор животного зависит от предполагаемого количества сыворотки. Получение сыворотки от кроликов, являющихся хорошими продуцентами антител, требует содержания большого количества таких животных. В большом количестве сыворотку можно получить от лошадей или других крупных животных.

Для определения в сыворотках количества антител и для характеристики активности диагностических сывороток, напр, агглютинирующих иммунных сывороток, производят их титрование. Титр агглютинирующих иммунных сывороток определяют как предельное разведение сыворотки крови, при к-ром обнаруживается реакция агглютинации. Обычно готовят разведения сыворотки, возрастающие в геометрической прогрессии (двукратные). Для характеристики активности сыворотки крови, как правило, учитывают результат реакции в каждом разведении или суммарно во всех разведениях по количеству условных положительных единиц.

Таблица 1. Перечень основных диагностических иммунных сывороток, их получение, применений в клинической иммунологии и форма выпуска

Получение сыворотки и иммунологическая реакция, в которой она используется

Источник

Иммуноглобулины человека, характеристика. Сыворотки крови

» data-shape=»round» data-use-links data-color-scheme=»normal» data-direction=»horizontal» data-services=»messenger,vkontakte,facebook,odnoklassniki,telegram,twitter,viber,whatsapp,moimir,lj,blogger»>

Иммуноглобулины человека, характеристика. Сыворотки крови

Введение
Иммуноглобулины. Характеристика
Сыворотки крови
Вирусная безопасность препаратов крови
Иммуноглобулины. Производство иммуноглобулинов
Производство сыворотки крови
Заключение
Литература
Введение

Иммунобиотехнология — это раздел современной биотехно­логии, представленной как научными достижениями, так и ди­намично развивающимся технологическим производством диа­гностических, профилактических и лекарственных средств с при­менением в качестве действующего начала разных агентов и про­цессов иммунной системы.
В наше время очень важную роль играют препараты крови. Так как они имеют широкий спектр применения в медицине, очень важно иметь представление о их качестве, характеристиках и области их применения.

Цель работы: изучить препараты крови в частности Сыворотки крови и иммуноглобулины.

Задачи:
1. Изучить характеристики, строение и классификацию иммуноглобулинов.
2. Изучить характеристики и классификацию сыворотки крови.
3. Выяснить что такое вирусная безопасность препаратов крови и какими методами она достигается.
4. Разобрать способы производства иммуноглобулинов и сывороток крови.

Иммуноглобулины. Характеристика

Иммуноглобулины – это группа близких по химической природе и свойствам глобулярных белков человека, которые обычно обладают свойствами антител, т.е. специфической способностью соединяться с антигеном, который стимулирует их образование. Иммуноглобулины продуцируются В-лимфоцитами и находятся либо в свободном виде в крови, либо в виде рецепторов на поверхностных мембранах клеток.

Иммуноглобулины. Классификация

Классификация иммуноглобулинов на основе типа тяжелой цепи:

Таблина1. Функции и содержание иммуноглобулинов в крови.

Содержание в крови, г/л

Антитела, защищающие слизистые оболочки

Ответ на появление аллергена

Иммуноглобулины. Функции иммуноглобулинов.

Антитела синтезируются B-лимфоцитами в ответ на появление антигенов в организме позвоночных или человека. В работе иммунной системы антитела участвуют в нескольких процессах:

Иммунологические свойства
Иммуноглобулины содержат полноценные опсонизирующие и нейтрализирующие антитела против возбудителей различных инфекционных заболеваний. В первые 24 часа после внутривенного введения 30% антител из системы циркуляции распределяются в экстрациркулярных пространствах. Период полувыведения антител варьирует в зависимости от индивидуальных особенностей и составляет в среднем 3 недели.

Иммуноглобулины. Строение иммуноглобулинов
Молекулы иммуноглобулинов симметричны. Они построены из «легких» (около 220 аминокислотных остатков) и «тяжелых» (450-600 аминокислотных остатков) полипептидных цепей (соотвенно L-цепи и Н-цепи), скрепленных дисульфидными связями и нековалентными взаимодействиями.

В антителах человека обнаружено два вида легких цепей (с и l) и пять видов тяжелых цепей (g, m, a, d и e), отличающихся аминокислотной последовательностью. При обозначении иммуноглобулинов в ниж. Индексах греческих букв цифры показывают, сколько цепей содержится в молекуле. Тяжелые цепи, характерные для каждого из классов и подклассов иммуноглобулинов, содержат по одному или более олигосахаридному фрагменту.

Рис.1. Строение иммуноглобулина G.

1– легкая цепь; 2 – тяжелая цепь; 3 – гипервариабельные участки; 4 – шарнирная область; 5 – остаток олигосахарида; 6 – N-концы; 7 – С-концы; VL и VH – соотв. Вариабельные домены легкой и тяжелой цепей; CH1, CH2 и СH3 – постоянные домены тяжелой цепи; пунктиром обведены Fab- и Fc-фрагменты.

Легкие и тяжелые пептидные цепи каждого класса иммуноглобулинов построены из двух основных областей – вариабельной, в среднем она равна у легких цепей 108, а у тяжелых 120 аминокислотным остаткам.

Основные различия между вариабельными областями антител разной специфичности сосредоточены в определенных положениях полипептидной цепи – гипервариабельных участках; их четыре в тяжелых и три в легких цепях. Эти участки принимают участие в контакте с антигеном, что и определяет специфичность антител. Постоянные области цепей иммуноглобулинов кодируются одним геном (для каждого класса и подкласса). Молекулы иммуноглобулинов связанные с поверхностью лимфоцитов, имеют дополнительные гидрофобные «хвосты» на С-концах тяжелых цепей, которые встроены в мембраны клеток. Пептидные цепи иммуноглобулинов и ряда белков клеточных мембран (антигены гистосовместимости, рецепторы для антигенов Т-лимфоцитов) по своей первичной структуре сходны между собой, что указывает на общее эволюционное происхождение всех этих белков. Отрезки легких и тяжелых цепей иммуноглобулинов примерно в ПО аминокислотных остатков свернуты в относительно независимые компактные глобулы (домены), каждый из которых содержит один дисульфидный мостик; легкие цепи содержат два домена (вариабельный и постоянный), тяжелые – четыре или пять (в зависимости от класса иммуноглобулинов), один из которых вариабельный.

По данным рентгеноструктурного анализа, основной тип укладки цепи в доменах соответствует антипараллельной b-структуре. Посредине тяжелых цепей иммуноглобулинов имеется так называемая шарнирная область с межцепьевыми дисульфидными связями (у IgG и IgA между первыми и вторыми доменами), длины которых неодинаковы у разных подклассов этих белков. Шарнирная область чувствительна к протеолитическим ферментам.
При расщеплении ими иммуноглобулин распадается на два идентичных Fab-фрагмента и один Fc-фрагмент.

Fab-Фрагмент слагается из четырех доменов. Два из них принадлежат легкой цепи, два других – N-концу тяжелой цепи. Fab-Фрагменты сохраняют способность к связыванию с антигеном.
Fc-Фрагмент состоит из четырех или шести доменов двух тяжелых цепей и определяет такие свойства иммуноглобулинов, как связывание им комплемента, возможность проникать через плаценту, присоединяться к клеткам и фиксироваться в коже.
Благодаря высокой подвижности в шарнирной области, Fab- и Fc-фрагменты обладают определенной свободой вращения относительно друг друга. Такая гибкость позволяет молекулам иммуноглобулинов оптимально присоединяться к антигенам, имеющим разное пространственное строение. Область, контактирующая с антигеном (паратоп, или активный, антигенсвязывающий центр), располагается на N-конце Fab-фрагментов; она представляет собой более или менее глубокую полость, стенки к-рой сформированы аминокислотными остатками гипервариабельных участков легкой и тяжелой цепей. У антител, связывающих белки и полисахариды, в полость может входить до 6-7 остатков аминокислот или моносахаров. У молекул IgG, IgD, IgE и IgA (молекула IgA построена подобно молекуле IgG) 2 активных центра, у молекул IgM – 10.

Комплекс с антигеном образуется в результате не ковалентных связей, характер, которых может варьировать в зависимости от специфичности антитела. Сила связывания с антигеном увеличивается на несколько порядков, если молекула антитела реагирует сразу с двумя областями связывания с одной молекулы антигена. Каждая молекула иммуноглобулина состоит из двух идентичных легких и двух тяжелых цепей. При расщеплении папаином молекула иммуноглобулина распадается на три части – два идентичных Fab-фрагмента и один Fc-фрагмент.

Сыворотки крови

Сыворотка крови – жидкая часть крови без форменных элементов и фибрина, образующаяся в процессе их отделения при свертывании крови вне организма. Сыворотка крови содержит агенты приобретенного иммунитета.
Фибриноген — бесцветный белок, растворённый в плазме крови. При активации системы свёртывания крови подвергается ферментативному расщеплению ферментом тромбином, образующийся фибрин-мономер под действием активного XIII фактора свёртывания крови полимеризуется и выпадает в осадок в виде белых нитей фибрина-полимера.
Эта группа препаратов предназначена для образования пассивно­го иммунитета (специфической иммуностимуляции), которые содержат поликлональные антитела против инфекционных агентов и микробных токсинов. При введении сыворотки больному его организм получает уже готовые анти­тела.

На сегодняшний день сыворотка крови широко используется в качестве основного действующего вещества лекарственных препаратах от большинства инфекционных заболеваний (гриппе, дифтерии, столбняке) и отравлениях (ботулотоксин, яды змей). Сыворотка, которая иммунизирована антигенами, используемая для производства лекарств, может вызывать аллергию из-за содержания в ней чужеродных белков. В данном случае имеет место сывороточная болезнь. Для клинической практики используется как свежая сыворотка крови, как и заранее замороженная или высушенная.

Сывороточная болезнь — это состояние, развивающееся при лечении иммунными сыворотками животного происхождения. Представляет собой иммунную реакцию на введение чужеродных белков сыворотки, заключающуюся в образовании большого количества связывающих их антител плазмоцитами организма человека. Данная реакция является частным случаем гиперчувствительности III типа. Антитела человека связывают чужеродные белки, образуя иммунные комплексы. При этом фагоцитоз и комплемент-зависимый лизис комплексов антиген-антитело происходит медленно, позволяя им оказывать повреждающее действие на организм.
Основные области применения сывороток:
профилактика и лечение инфекционных заболеваний;
в случае отравления ядами микробов или животных — при столбняке, бутулизме, дифтерии;
при укусах змей — для инактивации экзотоксинов в ядах коб­ры, гадюки и др.;
для диагностических целей (создание разных диагностических наборов, например в тестах на определение беременности).

Классификация данных препаратов идет соответственно области их применения:
1. Дифтерийный анатоксин
2. Столбнячный анатоксин
3. Cыворотка крови против змеиного яда
4. Ботулиновый анатоксин
5. Антигангренозная сыворотка

Сыворотки монорецепторные – иммунные сыворотки, содержащие антитело к видовым или вариантным антигенам. Получают гибридомной технологией (моноклоналъные Ат) или из поливалентных сывороток путем адсорбции групповых антител (адсорбированные сыворотки). Применяют для идентификации микробных организмов.

Сывороточный агар – элективная среда для выращивания стрептококков и других бактерий. Для его приготовления к расплавленному и охлажденному до 48°С 2,5% МПА, рН 7,4, приливают 15 – 20% лошадиной или бычьей сыворотки, осторожно, предупреждая вспенивание, размешивают и разливают по чашкам Петри. Контролируют на стерильность.
Вирусная безопасность препаратов крови
Компоненты крови, применяемые для переливания в клиниках, а также используемые для производства препаратов, сохраняют опасность заражения больных вирусами инфекционных заболеваний. Это связано с тем, что скрытый период вирусоносительства невозможно определить даже современными методами исследования крови доноров.

С целью обеспечения вирусной безопасности гемокомпонентов можно применять такие методы как:

Безопасность препаратов является не только следствием использования методов удаления и инактивации вирусов, но и результатом сочетания таких мер, как тщательный отбор доноров, тестирование плазмы донорской крови, строгих требований к хранению запасов. Необходимо следование точному описанию регулируемых производственных процессов, содержащемуся в GMP.

Иммуноглобулины. Производство иммуноглобулинов

Иммуноглобулины получают из пула плазмы крови здоровых доноров, отбор которых, а также процедура взятия крови осуществляется в соответствии с рекомендациями ВОЗ и Европейскими требованиями.
Индивидуальные порции плазмы, используемые для производства Иммуноглобулина, тестируются на отсутствие антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2, вирусу гепатита С и поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg).
В основе технологии производства Иммуноглобулина лежит метод спиртового фракционирования по Кону. Проводится вирусная инактивация и удаление примесей в процессе преципитации, фильтрации, диафильтрации и ультрафильтрации. Последовательные этапы вирусной инактивации позволяют получить препарат, очищенный от известных оболочечных и безоболочечных вирусов.
Препарат содержит 9—11% белка, не менее 98% белка составляет гаммаглобулин, 90% которого находится в виде мономера. Распределение подклассов IgG в препарате такое же, как в нормальной плазме. IgA и IgM присутствуют в следовых количествах. Препарат представляет собой прозрачную или слабо опалесцирующую жидкость, бесцветную или слабо-желтой окраски.

Иммуноглобулины. Методы получения иммуноглобулинов.

1. Фракционирование этанолом.
Пять основных белков были сконцентрированы в пяти последовательных фракциях ступенчатым осаждением путем увеличения концентрации этилового спирта: фибриноген (фракция I), g-глобулины (фракция ІІ), обогащенные липидами b-глобулины (фракция ІІІ), a-глобулины (фракция IV) и альбумин (фракция V). Фракция II+III, полученная по методу E. J. Cohn, стала исходным материалом для большинства технологий выделения. Дальнейшее фракционирование фракции II+III может продолжаться при помощи этилового спирта или других осаждающих агентов, таких как полиэтиленгликоль (ПЭГ) или каприлат. H. F. Deutsch и др. удалось увеличить выход IgG во фракции ІІ при применении пониженной ионной силы для осаждения фракции III.
В общем, выход IgG при фракционировании этиловым спиртом составляет примерно 3,5–4,2 г/л плазмы, так как 40–50% IgG остается (теряется) в надосадочных фракциях, которые не содержат IgG, или соосаждаются, т.е. также теряются с примесями. Приблизительно 5–10% соосаждается с фракцией I, 5–10% обнаруживается в надосадочной фракции II+III (фракция альбумина) и приблизительно 20% теряется с фракцией ІІІ. В дальнейшем на этапах от фракции ІІ до конечного препарата IgG еще 5–10% утрачивается в зависимости от разработанного процесса.
Практически все этапы осаждения должны проводиться при температуре ниже точки замерзания, чтобы избежать денатурирования белков. Это рассматривается как главный недостаток технологии фракционирования этиловым спиртом в дополнение к весьма низкому выходу.

Рис.2. Схема спиртового фракционирования плазмы по методу Кона.

Рис.3. Схема спиртового фракционирования по Онкли.

2. Хроматографическая очистка.

Наиболее часто встречающимся методом очистки IgG от сопутствующих белков плазмы крови, таких как IgA, IgM, альбумин, фибриноген и прекалликреин, является анионообменная хроматография. С ее помощью также можно удалить высокомолекулярные агрегаты.
Основное внимание уделяется IgG подкласса 4, которые имеют тенденцию связываться с активными группами сорбента. На этом этапе в оптимизированных условиях можно добиться достаточно высокого выхода IgG (

95%).
Главной целью этих процессов было превышение среднеотраслевого показателя выхода IgG 3,5 г/л плазмы, обеспечиваемого фракционированием спиртовым методом E. J. Cohn. Кроме того, использование этилового спирта, как необходимого агента, вызывало денатурацию белков и формирование агрегатов, а так же превращало весь процесс в потенциально пожаро- и взрывоопасный.

Применение анионообменной хроматографии, как первого этапа очистки IgG, позволило повысить выход белка на 32% и довести его до уровня 4,6г/л плазмы.
Катионообменная хроматография достаточно часто служит средством дополнительной очистки IgG в комбинации с анионообменной хроматографией, что обеспечивает умеренный выход целевого продукта.
Однако при непосредственном использовании плазмы в хроматографических процессах, рН и ионная сила самой плазмы мало соответствуют оптимальным условиям нанесения плазмы на анионо- или катионообменную колонку. В таком случае возможно использование двух путей оптимизации условий: мембранная диафильтрация с доведением рН и исключающей по размеру хроматографии в части полной замены буфера. Проведение мембранной диафильтрации цельной плазмы весьма затруднено из-за ее значительной вязкости.
Разбавление плазмы для ускорения процесса приводит к увеличению денатурации белков и существенному замедлению первого этапа, к значительному удорожанию процесса. Процесс замены буфера на исключающей по размеру хроматографической колоне достаточно дешевый, быстрый (один цикл составляет максимум 45 мин) и мало денатурирующий.
Исключающая по размеру хроматография является незаменимой для заключительной фазы разделения и обеспечивает разделение различных форм IgG (моно-, ди- и полимеров) по соответствующим им размерам, и поэтому важные для производства препарата IVIG-мономеры IgG могут быть практически полностью отделены от ди- и полимеров в стандартных условиях. Разделение исходного материала достигается в том случае, если выбран правильный хроматографический гель и он не перегружен белком. G. Iberer и соавт., например, использовали в полировочном этапе Superdex 200 («GE Healthcare AB», Швеция) для удаления полимеров из препарата IVIG [29].

В большинстве случаев сочетанное применение ионообменной и исключающей по размеру хроматографии способствует не только высокой степени очистки IgG (более 95%), но также и удалению реактивов, использованных для разрушения оболочечных вирусов методом растворитель-детергент [30]. После того, как IgG связывается с ионообменным сорбентом, указанные реактивы вымываются из колоны.
Правда, весьма низкая динамическая емкость катионообменных сорбентов не способствует полному удалению реагентов, хотя новое поколение сорбентов имеет улучшенную динамическую емкостьсвязующую способность, а исключающая по размеру хроматография служит дополнительным этапом удаления реагентов.

3. Смешанные методы.

Включение в схемы фракционирования осаждением IgG дополнительных хроматографических методов исторически было направлено прежде всего на удаление специфических агентов осаждения, например каприлата, полиэтиленгликоля (ПЭГ), окиси алюминия, спирта и т.д. Однако современные возросшие требования организаций, регулирующих выпуск лекарственных средств на рынок, обусловливают использование специализированных хроматографических методов для доведения чистоты и качества препаратов.
Фракционирование каприлатом. В 1960-х гг. было показано, что короткоцепочные жирные кислоты (C6-C12) формируют нерастворимые комплексы с a- и b-глобулинами, тогда как g-глобулины практически не осаждаются. М. Steinbuch с сотротрудниками описали процесс очистки IgG с помощью каприлата (т.е. октаноата С8-насыщенной жирной кислоты) как осаждающего агента. Неиммуноглобулиновые белки были осаждены из плазмы доноров разбавлением ацетатным буфером до конечного pH 4,8. Обогащенный раствор IgG был получен после дополнительного введения каприлата при энергичном перемешивании. Чистота и выход зависели от концентрации каприлата, pH, молярности буфера и фактора разведения.Авторы показали, что каприлат эффективно вводить в плазму в два приема с удалением осадков между ними.

Рис.4. Схема смешанного типа получение иммуноглобулина.

Получение сыворотки крови

Получают сыворотки путем иммунизации домашних животных (ослов, лошадей). Забор крови у этих животных производят в пе­риод максимального содержания антител, однако для этого необ­ходимо постоянно контролировать кровь по такому показателю, как титр антител, что представляет определенные технические трудности. Из крови животных выделяют плазму, затем из нее удаляют фибрин и получают сыворотку.
Приготовленные таким способом сывороточные препараты ха­рактеризуются относительно низкой активностью и существен­ным количеством примесей. Сыворотки можно получать также из культивируемых на искусственной питательной среде животных клеток. Однако главной проблемой в этом случае является обеспе­чение стабильного роста животных клеток вследствие их генети­ческой нестабильности, непостоянства генетических экспрессий и старения.

Способ получения сыворотки крови из животного включает два этапа.

Заключение

В ходе своей работы изучила препараты крови такие как иммуноглобулина и сыворотки крови. Изучила их характеристики и классификации. Так же у иммуноглобулинов было изучено их строение и применение в медицине.
Подробно разобрала методы получения иммуноглобулинов и сывороток крови.
Было изучено понятие вирусной защищенности препаратов крови. Так же были изучены методы ее достижения.

Литература
1. «Получение рекомбинантных антител и способы увеличения их аффинности», Е.П. Альтшулер, Д.В.Серебряная, А.Г.Катрухина;
2. Русланов В.М., Левин И., «Лечебные препараты крови», Москва 2004г;
3. «Технология получения иммуноглобулинов» Г.Л.Волков, киев 2008г;
4. Иванов А.В., Плотникова Э.М., Гурьянов Н.И., Хусаенов Р.Х., «Технология производства препаратов крови». Г.Казань 2007г;
5. А.Г.Исрафилов, М.М.Алсынбаев, В.А. Трофимов, Л.К. Лаптева, « Иммуноглобулин человека нормальный. Препараты для внутривенного и подкожного введения», Уфа 2008г;
6. Ю.О.Сазыкин, С.Н.Орехов, И.И.Чакалева, «Биотехнология», Москва 2008г.

Источник