Буккальный эпителий что это такое
Буккальный эпителий что это такое
Материалы и методы исследования
Клетки буккального эпителия получали путем соскоба с внутренней поверхностимаксиллярной зоны щеки, выше линии смыкания зубов, на уровне 5-6 зубов.Перед взятием мазка проводилась гигиеническая оценка состояния полости рта. Мазок-соскоббрался одноразовым пластмассовым шпателем из интактных участков слизистой оболочки щеки без травмирования слизистой оболочки. Полученный материал переносили на предметные стекла, высушивали, фиксировали в абсолютном спирте. Окраска по Паппенгеймупроизводилась в 2 этапа: в первый окрашивали метиленовым синим по Май-Грюнвальду (15 мин), во второй- азур-эозином по методу Романовского-Гимзе в течении 25 мин.
Результаты исследования и их обсуждение
Содержание эпителиоцитов3 стадии в цитограмме у здоровых детей составило1,8±0,1%. Они имеют овальную форму и умеренно-базофильную цитоплазму. Ядра клеток отличаются хорошо выраженным рисунком хроматина, имеющим нежносетчатый характер.У детей с аномалиями зубочелюстной системы до ортодонтического леченияих содержаниеувеличилось почти в два раза и равнялось 3,9±0,61%. В начальный период леченияпродолжалось их увеличение до6,7±0,63%. В период стабилизации наблюдалось снижениедо 4,4±0,72%. Взаключительный периодоно равнялось 2,7±0,52%Содержание эпителиоцитов 4 стадии у здоровых детей составило 20,3±0,5%. Они характеризуются полигональной формой. Цитоплазма выглядит слабобазофильной, гомогенна, серо-голубого цвета. Ядра клеток, по сравнению с предыдущей стадией, уменьшаются в размере, структура ядер более грубая, на фоне хроматиновой сети довольно часто встречаются интенсивно окрашенные комки хроматина. До начала ортодонтического лечения и в процессе лечения их содержание сохранялось на значениях 20,7±0,58%; 19,6±0,56%; 20,6±0,49%. И в заключительный период оно равнялось 19,9±0,37%.
Рис. Процентное содержание буккальныхэпителиоцитовв процессе ортодонтического лечения
В начальный период лечения вцитограмме повышалось содержание клеток II и III стадий дифференцировки, наблюдалось снижение содержания эпителиоцитовV и V стадий Выявлялись многоклеточные эпителиальные комплексы, что свидетельствовало о разрыхлении эпителиального пласта, нарушении межклеточных связей и десквамации эпителиальныхклеток.. У 75% обследованных детей отмечен катарральный гингивит и локальный парадонтит.
Заключение
Полученные данные позволяют рекомендовать цитологическое исследование буккального эпителия в качестве одного из индикаторов нарушений гомеостаза ротовой полости в процессе ортодонтического лечения аномалий развития зубочелюстной системы у детей.
Изменение цитологического состава соскоба эпителия слизистой в виде появления парабазальных клеток, многоклеточных комплексов, голоядерных клеток и увеличении числа нейтрофилов позволяет своевременно диагностировать катаральный гингивит и локализованный пародонтит с целью проведения лечебных и реабилитационных мероприятий.
Буккальный эпителий что это такое
В настоящее время люди ищут более простые и информативные методы диагностики изменения гомеостаза человека. Одним из современных методов диагностики является исследование клеток буккального эпителия полости рта. Этот объект является одним из не инвазивных тестов, отражающих общее состояние человека. Отклонение биохимических, физико-химических и морфофункциональных показателей, возникающие под воздействием различных экзогенных и эндогенных факторов, приводят к изменениям дифференцировки эпителия, регистрируемым морфологически (размер, характер ядер и гранул, признаки цитолиза), а также изменению заряда на поверхности ядра живой клетки.
Цель исследования – провести сравнительную характеристику методов определения состояния эпителиальных клеток слизистой оболочки полости рта.
Цитологический метод. Со слизистой оболочки щеки стерильным шпателем соскабливают эпителиальные клетки, которые аккуратно наносят на предметное стекло. Мазок фиксируют метанолом в течение 1 суток. Далее проводят предварительный гидролиз соляной кислотой (37 °С, 30мин) и окрашивают по Фёльгену. На каждом стекле подсчитывают некоторое количество клеток. В образцах буккального эпителия определяют частоту встречаемости клеток с аномалиями ядра [1]. Микроядра идентифицируют как округлые хроматиновые тела с непрерывным гладким краем, лежащие в цитоплазме отдельно от ядра в одной плоскости с ним и имеющие тот же рисунок хроматина и окраску той же интенсивности. Параллельно учитывают клетки с другими ядерными аномалиями: кариопикноз – плотное гомогенное ядро, размером до 6 мкм; кариорексис – распад ядра на отдельные части с гомогенной структурой; двуядерные клетки идентифицируют, если рисунок цитоплазмы не указывает на наложение двух клеток и отсутствует наложение ядер; амитоз – клетки с двумя тесно примыкающими друг к другу ядерными структурами, примерно равными по размеру, разделенными достаточно глубокой бороздой, но на небольшом протяжении сливающимися; феномен «разбитого яйца» – ядро, связанное с основным ядром ахроматиновым мостиком; клетки с лизисом ядерной мембраны – клетки с негладким прерывистым краем ядер [7]. По наличию той или иной ядерной аномалии можно судить о механизме воздействия патогенного фактора на клетку.
Метод внутриклеточного микроэлектрофореза. Сущность метода состоит в том, что у здорового человека ядра клеток буккального эпителия в электрическом поле смещаются к аноду, т. е. они электроотрицательны. У клеток с патологией изменяется заряд мембраны, следовательно, такие клетки меняют свое «нормальное» направление в электрическом поле. Установка для микроэлектрофореза состоит из стабилизатора, камеры для микроэлектрофореза и микроскопа. Камера представляет собой предметное стекло с платиновыми электродами, находящимися на расстоянии 2 см друг от друга. Стабилизатор предназначен для преобразования напряжения электросети в постоянную величину напряжения 50 В и подачи его на камеру микроэлектрофореза. Напряженность в камере при этом составляет 2500 В/м, а величина тока 0,1—0,2 мА. Нарушение электрокинетических свойств ядер буккального эпителия в форме значительного уменьшения количества подвижных ядер говорит о наличии патологии. Такое явление наблюдается у больных алкоголизмом и гипертонической болезнью.
При дополнительной оценке скорости пробега ядер буккального эпителия с помощью окуляр-микрометра возможно составить интегральную кривую. При анализе данной кривой возможно проследить зависимость процента электроподвижных ядер от возраста и определить биологический возраст испытуемого [6].
Метод определения конденсации хроматина. При окрашивании ядра клетки орсеином в нем можно четко определить количество гранул гетерохроматина. Этот показатель характеризует морфологический параметр клеточного ядра, связанный с его функциональным состоянием. Для определения изменения степени конденсации хроматина в интерфазных ядрах клеток буккального эпителия клетки окрашивают в 2% растворе орсеина в 45% уксусной кислоте, в течение 30 мин, затем рассматривают при увеличении х600. Определяют среднее количество гранул гетерохроматина на одно ядро, потом подсчитывают среднюю величину содержания гранул гетерохроматина для некоторого количества ядер и величину статистической ошибки. Повышение показателя содержания гранул гетерохроматина свидетельствует о возрастании степени конденсации хроматина.
Как правило, явление конденсации хроматина связано с понижением активности биосинтетических процессов в ядре [10]. Эта реакция является также неспецифическим клеточным ответом на действие повреждающих факторов [11]. Также известно, что содержание стрессовых гормонов в крови возрастает в ответ на физическую нагрузку [9]. Было установлено, что гормоны стресса вызывают увеличение содержания гранул гетерохроматина в концентрациях, близких к физиологическим [8], поэтому в случае утомления, вызванного физическими нагрузками конденсация хроматина может быть связана с воздействием гормонов стресса [5].
Метод лазерной корреляционной спектрометрии (ЛКС). Для измерения размеров наночастиц используется метод динамического рассеяния света (ДРС). Данный метод позволяет определить коэффициент диффузии дисперсных частиц в жидкости путем анализа корреляционной функции флуктуаций интенсивности рассеянного света. Далее, из коэффициента диффузии рассчитывается радиус наночастиц. Метод ЛКС позволяет определять дисперсный состав исследуемой жидкости по относительному вкладу содержащихся в ней частиц в рассеяние света. Распределение частиц по размерам, в результате математической обработки, позволяет охарактеризовать дисперсный состав конкретной биологической жидкости и классифицировать распределения в соответствии с выделенными информативными зонами спектра.
Для рото-глоточных смывов принято выделять следующие информативные зоны – низкомолекулярную (0-50 нм), среднемолекулярную (51-400 нм), высокомолекулярную (401-2000 нм) и сверхвысокомолекулярную (выше 2000 нм). Предполагается, что нарастание площадей низко- и среднемолекулярных мод ЛК-спектров свидетельствует о преобладании процессов биосубстратной деградации, а высоко- и сверхвысокомолекулярных мод – о преобладании процессов биосубстратной полимеризации. На этих принципах создан классификатор, позволяющий по характеру распределения частиц выделить три типа спектров: «норма», спектры с преобладание катаболических процессов и спектры с преобладанием анаболических процессов [1]. Так у клеток с кариорексисом или кариолизисом преобладает катаболический тип ЛК-спектра. Это происходит из-за выхода из клеток разрушенного ядерного материала, что приводит к увеличению вклада в светорассеяние низкомолекулярной субфракции, которое характерно для катаболических процессов.
Заключение. Таким образом, среди рассмотренных методов нет ни одного, который подходил бы для диагностики всех заболеваний. Отдельно взятый метод имеет свои достоинства и недостатки. Так, например, цитологический метод прост в использовании, не требует специализированного оборудования и высокой квалификации микроскописта. Появление микроядер в клетках буккального эпителия служит хорошим индикатором воздействия ксенобиотиков или лучевого поражения. Однако этот метод отражает только цитогенетические характеристики и не дает возможности определить локализацию патологии. Остальные методы более сложны в использовании и требуют дорогого оборудования для их осуществления, но позволяют исследовать клетки более детально. С помощью метода внутриклеточного микроэлектрофореза можно определить функциональное состояние человека и его биологический возраст
Метод определения конденсации хроматина показывает влияние стрессовых факторов на состояние организма и утомляемость человека при физических нагрузках. С помощью, описанных выше, методов можно исследовать отдельные структуры клетки. Но для более объективной оценки функционального состояния человека по буккальному эпителию необходимо использовать комплексный подход.
Буккальный эпителий что это такое
Буккальный эпителий является традиционным объектом цитологического исследования, преимуществом которого является неинвазивное для исследуемого взятие материала с приготовлением мазков и отпечатков. Он играет важную роль в диагностике социально значимых заболеваний [1, 2]. Буккальные эпителиоциты могут быть индикатором местных и общих нарушений гомеостаза у взрослых и детей [3–5]. Для идентификации стадий дифференцировки буккальных эпителиоцитов необходимо учитывать их характерные цитологические особенности: форму и размеры клеток, интенсивность окраски цитоплазмы и ядра. Находит применение морфометрическое исследование площадей ядра и цитоплазмы, определение ядерно-цитоплазматического отношения, денситометрическое иследование клеток для дифференцировки эпителиоцитов. Этот метод основан на избирательном поглощении различными веществами лучей со строго определенной длиной волны. Интенсивность поглощения света зависит от концентрации вещества. Наши исследования показали, что у детей при оптической плотности ядра от 0,004 усл. ед. и ниже в основном встречаются эпителиоциты 3-й стадии развития, оптической плотности от 0,06 до 0,10 усл. ед. содержатся клетки 4-й стадии. И при эначениях показателя от 0,14 и выше олределяются клетки 5-й стадии дифференцировки [6, 7].
Цель исследования: изучение и сопоставление денситометрических параметров оптической плотности ядра и оптической плотности содержания гликогена в цитоплазме эпителиоцитов разной стадии дифференцировки у детей различного возраста.
Материалы и методы исследования
В период первого детства (от 4 до 7 лет) было обследовано 56 здоровых детей, во втором детстве изучены мазки 67 детей. В пубертатный период (13–16 лет) исследование проведено на 39 подростках. До забора материала дети прополаскивали ротовую полость физиологическим раствором. Соскоб эпителия получали пластиковым шпателем со слизистой щеки. Мазки эпителия переносили на предметные стёкла, высушивали и фиксировали в спиртацетоне (1:1) в течение 5 мин окрашивали метиленовым синим (15 мин), затем азурэозином в течение 30 мин. Для изучения содержания в цитоплазме клеток гликогена мазки окрашивались шифф-реактивом. В мазках определяли в процентах клетки различных стадий дифференцировки на 1000 клеток. Для морфоденситометрического исследования использован комплекс: микроскоп, видеокамера и компьютер. В каждой возрастной группе получали черно-белые изображения эпителиоцитов каждой стадии дифференцировки в формате JPG. Всего цитометрическому и денситометрическому исследованиям подвергнуто более 10000 эпителиальных клеток. Затем определяли площади клеток, их ядер в мкм2 и ядерно-цитоплазматическое отношение. Затем денситометрически исследовали среднюю плотность и содержание гликогена в цитоплазме. Для изучения тинкториальных свойств ядер эпителиоцитов разной стадии дифференцировки определяли оптическую плотность интерфазного ядра. Статистический анализ полученных данных проводили с помощью профессионального пакета статистических программ Statsoft «Statistica-6», методами вариационной статистики. При корреляционном анализе применяли коэффициент корреляции Пирсона.
Результаты исследования и их обсуждение
Среди буккальных эпителиоцитов во всех возрастных группах детей в норме в соскобе различают клетки 3-й, 4-й, 5-й и 6-й стадий дифференцировки. Они отличаются процентным содержанием, формой, размерами, площадью ядра и цитоплазмы.
В период первого детства содержание клеток 3-й стадии дифференцировки в цитограмме незначительно и составляет 2,7 ± 0,53 %, Число эпителиоцитов 4-й стадии равно 31,1 ± 1,70, клеток 5-й стадии превалирует и составляет 58, ± 2,35. С повышением степени кератинизации поверхностные клетки превращаются в безъядерные – 6-й стадии дифференцировки. Процент клеток 6-й стадии в цитограмме равен 2,1 ± 0,27. Ядерно-цитоплазматическое отношение эпителиоцитов 3-й стадии равняется 0,05 ± 0,001. Оптическая плотность ядер составляет 0,03 ± 0,001усл. ед.
В клетках 3 стадии дифференцировки содержится большое количество гранул гликогена, которые заполняют всю цитоплазму, окрашивая её в пурпурный цвет. Наблюдается тенденция к формированию конгломератов. Средняя оптическая плотность гликогена в клетках равна 0,244 ± 0,0197 усл. ед. Ядерноцитоплазматическое отношение эпителиоцитов 4-й стадии равняется 0,04 ± 0,001. Оптическая плотность ядер составляет 0,08 ± 0,002 усл. ед. Цитоплазма клеток 4-й стадии сохраняет положительную реакцию на гликоген, но интенсивность окраски по сравнению с клетками 3-й стадии уменьшается, гранулы гликогена диффузно рассеяны по всей цитоплазме. Оптическая плотность гликогена клеток 4-й стадии дифференцировки существенно уменьшается (р
ВС РФ: взятие буккального эпителия для генетических исследований уже само по себе требует наличия медлицензии по генетике
 |
| dusanpetkovic / Depositphotos.com |
Штраф в 40 000 рублей заплатил медцентр, который, – сам не имея лицензии на осуществление первичной специализированной медико-санитарной помощи в амбулаторных условиях по генетике – отбирал у пациентов образцы буккального эпителия и направлял их в генетическую лабораторию (третье лицо, у которого имеется соответствующая лицензия). Наказание было наложено судом по ч. 2 ст. 14.1 КоАП (Осуществление предпринимательской деятельности без лицензии) (Определение Верховного Суда РФ от 11 декабря 2019 г. № 308-ЭС19-22433 «Об отказе в передаче жалобы в Судебную коллегию Верховного Суда Российской Федерации»).
Медицинский центр был с этим категорически не согласен:
Однако, вышестоящие инстанции тоже нашли в деятельности центра состав правонарушения:
Верховный Суд РФ полностью согласился с этим, заодно не согласившись с медцентром в вопросе исчисления срока давности привлечения к ответственности.
Дело в том, что Росздравнадзор составил протокол по ч. 2 ст.14.1 КоАП РФ в начале ноября, без проведения проверки, на основе жалобы от пациентки. Однако пациентка жаловалась на забор буккального эпителия еще летом. А это значит, что на момент наложения штрафа трехмесячный срок давности привлечения истек, – по мнению оштрафованного медцентра.
На это ВС РФ отметил, что – исходя из установленных обстоятельств, – на момент составления протокола, то есть в начале ноября, медцентр продолжал собирать буккальный эпителий, то есть осуществлять подлежащую лицензированию деятельность. А значит, и срок давности нужно исчислять от дня составления протокола, а не от дня забора спорных образцов эпителия.
Буккальный эпителий что это такое
Материалы и методы исследования
Обследовано 107 подростков в возрасте 12-16 лет с аномалиями развития зубочелюстной системы, из них 33 до начала лечения (1 группа), 37 в течении 1 – 3 месяцев (2 группа) и 37 в течении 6 мес. – 1 года ортодонтического лечения (3 группа). Аномалии развития были представлены аномалиями положения отдельных зубов, аномалиями зубных рядов в трансверсальном, сагитальном или вертикальном направлении, и аномалиями прикуса. Объектом исследования послужили мазки со слизистой максилярной зоны щеки, выше линии смыкания зубов. Мазки эпителия переносили на предметные стекла, высушивали и фиксировали в абсолютном спирте, окрашивали окрашивали по Папенгейму. В мазках при микроскопировании подсчитыввали эпителиальные клетки различных стадий дифференцировки, в том числе инфильтрированные микроорганизмами, дистрофически измененные и «фагирующие» эпителиоциты, кроме того, выявлялись моноциты, нейтрофилы, лимфоциты и голоядерные клетки. По процентному соотношению компонентов цитограмм высчитывался ряд интегральных показателей: ИДиф, ИЛС,ВДИ,ИД, ИМЭК. Статистический анализ полученных данных проводили с помощью пакета статистических программ StatSoft «Statistica», методами вариационной статистики с помощью критерия Стьюдента.
Результаты исследования и их обсуждение
В процессе обследования принимали во внимание характер жалоб на состояние в полости рта, выясняли стоматологический статус Во 2 группе у 75 % подростков, с брекет-системами, имелись явления катарального гингивита. Объективно слизистая оболочка губ, щек у них в местах контакта со съемным ортодонтическим аппаратом была гиперемирована слабо увлажнена, участками отечна с усилением сосудистого рисунка.. Маргинальная часть десны и межзубные сосочки были отечны и слабо гиперемированы. При надавливании на основания сосочков наблюдалась кровоточивость из их вершин. Проба Шиллера-Писарева была положительна. Папилярно-маргинальный индекс был равен 30 %. Гигиенический индекс был равен 1,6. Сравнительный анализ цитограмм до и после начала ортодонтического лечения показал, что в мазках подростков 2 группы повышалось содержание парабазальных клеток(0,4 ± 0,14 %, 1,4 ± 0,29 %, p